ORCのリン酸化による、細胞周期制御

• Project Area: Cell Proliferation Control
• Project/Area Number: 22019028
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Keio University (2011); Kumamoto University (2010)
• Principal Investigator: 水島 徹 慶應義塾大学, 薬学部, 教授 (00264060)
• Project Period (FY): 2010 – 2011
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥6,000,000 (Direct Cost: ¥6,000,000); Fiscal Year 2011: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000); Fiscal Year 2010: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
• Keywords: ORC / リン酸化 / 細胞周期制御

Research Abstract

以下に述べる二つの方法でOrc2p-Ser188のリン酸化、及びOrc5pのATP結合を調節する因子を同定した。
一つ目の方法は、活性を指標とした蛋白質の精製である。即ち、酵母の核粗抽出液中にOrc2p-Ser188のリン酸化を阻害(促進)する活性、あるいはOrc5pとATPとの結合を阻害(促進)する活性を見いだしたので、その活性を指標にカラムクロマトグラフィーによりその因子を精製した。同定したタンパク質は新規なタンパク質であり、現在その構造決定を行っている。
一方、ORCに結合する因子を網羅的に同定し、その中からOrc2p-Ser188のリン酸化を阻害(促進)する因子、あるいはOrc5pとATPとの結合を阻害(促進)する因子を同定した。我々はyeast two-hybrid法を用いて、ORCに結合する因子の網羅的同定を行った。その結果新規蛋白質も含め、30以上のORCに結合する蛋白質(Orc1p:5個,Orc2p:4個,Orc3p:7個,Orc4p:5個,Orc5p:3個,Orc6p:9個)を発見した。そこでこれらの因子の中から既存の因子とのホモロジーなどを参考にして、Orc2p-Ser188のリン酸化、及びOrc5pのArp結合活性を調節する可能性のある因子を絞り込んだ。次に候補因子を多量発現させた酵母細胞から核粗抽出液を調製し、目的の活性が上昇しているのかを調べるところ、候補因子を複数同定することに成功した。

Research Products

• [Journal Article] Suppression of Alzheimer's disease-related phenotypes by expression of heat shock protein 70 in mice (2011)
  • Author(s): Hoshino. T., et al
  • Journal Title: J.Neurosci. Volume: 31 Pages: 5225-5234
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Acetaminophen-induced differentiation of human breast cancer stem cells and inhibition of tumor xenograft growth in mice (2011)
  • Author(s): Takehara. M., et al
  • Journal Title: Biochem.Pharmacol. Volume: 81 Pages: 1124-1135
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Therapeutic effect of lecithinized superoxide dismutase on pulmonary emphysema (2011)
  • Author(s): Tanaka. K., et.Al.
  • Journal Title: J.Pharmacol.Exp.Ther. Volume: 338 Pages: 810-818
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Induction of EMT-like phenotypes by an active metabolite of leflunomide and its contribution to pulmonary fibrosis. (2010)
  • Author(s): Namba, T., et al.
  • Journal Title: Cell Death Differ. Volume: 17 Pages: 1882-1895
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Heat shock protein 70 protects against bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice. (2010)
  • Author(s): Tanaka, K., et al.
  • Journal Title: Biochem.Pharmacol. Volume: 80 Pages: 920-931
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Suppression of expression of endoplasmic reticulum chaperones by Helicobacter pylori and its role in exacerbation of NSAID-induced gastric lesions. (2010)
  • Author(s): Namba, T., et al.
  • Journal Title: J.Biol.Chem. Volume: 285 Pages: 37302-37313
  • Peer Reviewed