正と負の選択におけるシグナル伝達機構の相違の解明

• Project Area: Immunological Self Recognition and its Disorders
• Project/Area Number: 22021050
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Research Institute, International Medical Center of Japan
• Principal Investigator: 鈴木 春巳 国立国際医療研究センター(研究所), 免疫病理研究部, 部長 (70235985)
• Project Period (FY): 2010 – 2011
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥9,600,000 (Direct Cost: ¥9,600,000); Fiscal Year 2011: ¥4,800,000 (Direct Cost: ¥4,800,000); Fiscal Year 2010: ¥4,800,000 (Direct Cost: ¥4,800,000)
• Keywords: 胸腺 / T細胞細胞 / 自己免疫 / 正の選択 / シグナル伝達

Research Abstract

研究実施計画に則り実験を行い、以下の新たな知見を得た。(1)Themis(Gasp)-Tgマウスの解析:Themis過剰発現マウスにおいて、TCR刺激によるIL-2の産生が亢進していることを新たに見出した。逆にIL-4の産生は減弱しており、単純なシグナル伝達の増強ではないことが示唆された。(2)シグナル伝達解析:OT-I-TCR-Tgマウスを用いて詳細に検討したところ、Themis-KOの選択前DP細胞においては、TCR刺激によるERKの活性化には変化ないことが明らかとなった。正の選択を誘導する弱い刺激(Q4H7変異ペプチド)でも負の選択を誘導する強い刺激(OVAペプチド)でも、Themis-KOにおいて初期ERKシグナルは変化がなかった。現在までのところ、NFAT,NFkB経路のシグナル伝達においてもKOとWTとの差異は見られていない。今年度は、あらたにThemisが刺激依存性にリン酸化されることを見出した。また内在性のGrb2と構成的に結合していることも証明することができた。(3)ドメイン変異マウスの解析:CABIT1,プロリンリッチ領域(PRR)欠失トランスジェニックマウスThemisKOに交配し、Themis分子内ドメインの機能を検証した。いずれのマウスにおいても胸腺内の正の選択が阻害されており、CABIT1およびPRRドメインがThemisの機能発現に必須であることが証明された。(4)結合パートナーの探索:HA-Themis-Tgマウスの胸腺細胞より抗HA抗体で免疫沈降し、KOに存在せず、Tgにのみ存在するバンドを特定し、MAS解析によりその分子を同定した。詳細な解析を現在進めている。

Research Products

• [Journal Article] Ectopic expression of a T-box transcription factor, eomesodermin, renders CD4+ Th celss cytotoxic by activating both perforin-nad FasL-pathways (2012)
  • Author(s): Eshima, K, et al
  • Journal Title: Immunol Lett Volume: 144 Pages: 7-15
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Dystrophin conferral using human endothelium expressing HLA-E in the non-immunosuppressive murine model of Duchenne muscular dystrophy (2011)
  • Author(s): Cui, CH., et al
  • Journal Title: Hum Mol Genet Volume: 20 Pages: 235-244
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The role of endogenous glucocorticoid in lymphocyte development in MC2R-/-mice (2010)
  • Author(s): Sato, y., et al.
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun Volume: 403 Pages: 253-257
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Dystrophin conferral using human endothelium expressing HLA-E in the non-immunosuppressive murine model of Duchenne muscular dystrophy (2010)
  • Author(s): Cui, CH., Et al.
  • Journal Title: Hum Mol Genet Volume: 20 Pages: 235-244
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Overexpression of Gasp (Themis) auguments positive selection of thymocytes (2011)
  • Author(s): Okada, T., et al
  • Organizer: 6^<th> Leukocyte Signal Transduction Workshop
  • Place of Presentation: Crete, Greece
• [Presentation] Gasp (Themis) is critically required for thymocyte positive selection (2010)
  • Author(s): Patrick, MS., et al.
  • Organizer: 14^<th> International Congress of Immunology
  • Place of Presentation: Kobe, Japan