変性構造転移による膜蛋白質シグナル伝達機構の固体ＮＭＲによる解明
| Project Area | Target recognition and expression mechanism of intrinsically disordered protein |
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| Project/Area Number |
22113512
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Review Section |
Biological Sciences
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
藤原 敏道 大阪大学, たんぱく質研究所, 教授 (20242381)
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| Project Period (FY) |
2010 – 2011
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2011)
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| Budget Amount *help |
¥12,480,000 (Direct Cost: ¥9,600,000、Indirect Cost: ¥2,880,000)
Fiscal Year 2011: ¥6,240,000 (Direct Cost: ¥4,800,000、Indirect Cost: ¥1,440,000)
Fiscal Year 2010: ¥6,240,000 (Direct Cost: ¥4,800,000、Indirect Cost: ¥1,440,000)
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| Keywords | 核磁気共鳴 / 膜蛋白質 / 膜タンパク質 / 変性構造 |
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| Research Abstract |
ppR二量体および ppR・pHtrII複合体など膜蛋白質の変性領域について固体ＮＭＲ法で解析を行った。その複合体の試料調製で、必要な数mgの安定同位体標識試料を作り、機能のある状態で脂質二重膜へ再構成した。対象の分子量が約10万と大きく、NMR感度が十分でないため、固体ＮＭＲの新しい非線形サンプリングなどの手法で分解能・感度を向上させる。構造解析では、ＮＭＲプロテオミクス研究や計算機科学の最先端の技術として、データベースに基づくＮＭＲスペクトルシミュレーション法と脂質膜を考慮したレプリカ交換動力学法を組み合わせて利用した。この方法論を確立した。複合体を活性状態に転移させるために、超伝導磁石内のＮＭＲ試料に光照射できるよう装置を改造すした。特にpHtrIIの水溶性領域の天然変性構造の変化に注目してＮＭＲ測定するために、Ｊ結合相関に基づく高速試料回転多次元ＮＭＲ法や電子スピンとの距離測定法も開発して応用した。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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Report
(2 results)
Research Products
(12 results)
