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繊毛内タンパク質輸送装置とトランジションゾーンのメゾスケール構造-機能相関の解明

Publicly Offered Research

Project AreaNew cross-scale biology
Project/Area Number 22H05539
Research Category

Grant-in-Aid for Transformative Research Areas (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Transformative Research Areas, Section (III)
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

加藤 洋平  京都大学, 薬学研究科, 連携教授 (90568172)

Project Period (FY) 2022-06-16 – 2024-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help
¥9,360,000 (Direct Cost: ¥7,200,000、Indirect Cost: ¥2,160,000)
Fiscal Year 2023: ¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2022: ¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Keywords一次繊毛 / 繊毛病 / IFT装置 / トランジションゾーン / ゲノム編集 / 膨張顕微鏡法 / 超解像顕微鏡
Outline of Research at the Start

一次繊毛は細胞のアンテナとして機能するオルガネラであり、その異常は多様な重篤症状を呈する繊毛病を引き起こすことから医学的に極めて重要である。本研究では一次繊毛の形成や機能維持において基盤となる繊毛内タンパク質輸送(Intraflagellar transport: IFT)装置および繊毛のタンパク質の出入りを制御しているトランジションゾーン(Transition zone: TZ)のメゾスケール(20-500 nm)での構造-機能相関の解明を目指す。

Outline of Annual Research Achievements

一次繊毛は細胞のアンテナとして機能するオルガネラであり、その異常は繊毛病と呼ばれ、多様な重篤症状を引き起こす。これらの症状は、一次繊毛の形成や機能維持に重要な役割を果たす繊毛内タンパク質輸送(Intraflagellar transport: IFT)装置およびトランジションゾーン(Transition zone: TZ)の異常により引き起こされる。本研究では、IFT装置とTZのメゾスケール(20-500 nm)での構造-機能相関を解明することを目指した。
本年度は、繊毛病の原因でありトランジションゾーンに関与すると予想されるTMEM218を対象に研究を進めた。まず、CRISPR/Cas9技術を活用して不死化ヒト網膜色素上皮細胞(hTERT-RPE1)からTMEM218を欠損させたノックアウト(KO)細胞株を樹立した。繊毛の形成には大きな影響がなかったものの、繊毛に局在する膜タンパク質に異常が観察された。次にレンチウイルスベクターを使用し、野生型および繊毛病型遺伝子をKO細胞に導入し、表現型の違いを評価した。ジュベール症候群(JBTS)関連のTMEM218変異体を導入した場合、TZのバリア機能が回復したことが確認された。一方で、メッケル症候群(MKS)関連の変異体では回復が見られなかった。これにより、繊毛異常が疾患の重症度と相関していることが示唆された。
さらに、Ultrastructure expansion microscopy(U-ExM)を用いた条件検討を行い、IFTタンパク質が繊毛の基底小体で取る9回対称構造を明瞭に観察する方法を開発した。現在はこの手法を用いてIFT装置やTZの構造を超解像で観察し、それらの構造と機能の詳細な解析を進めている。

Research Progress Status

令和5年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

令和5年度が最終年度であるため、記入しない。

Report

(2 results)
  • 2023 Annual Research Report
  • 2022 Annual Research Report
  • Research Products

    (35 results)

All 2023 2022 Other

All Journal Article (11 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Peer Reviewed: 8 results,  Open Access: 4 results) Presentation (22 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results) Remarks (2 results)

  • [Journal Article] Mirror-Image Single-Domain Antibody for a Novel Nonimmunogenic Drug Scaffold2023

    • Author(s)
      Aoki Keisuke、Manabe Asako、Kimura Hiroyuki、Katoh Yohei、Inuki Shinsuke、Ohno Hiroaki、Nonaka Motohiro、Oishi Shinya
    • Journal Title

      Bioconjugate Chemistry

      Volume: 34 Issue: 11 Pages: 2055-2065

    • DOI

      10.1021/acs.bioconjchem.3c00372

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    • Author(s)
      Tasaki Koshi、Zhou Zhuang、Ishida Yamato、Katoh Yohei、Nakayama Kazuhisa
    • Journal Title

      Human Molecular Genetics

      Volume: 32 Issue: 19 Pages: 2887-2900

    • DOI

      10.1093/hmg/ddad112

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    • Author(s)
      Hiyamizu Shunya、Qiu Hantian、Tsurumi Yuta、Hamada Yuki、Katoh Yohei、Nakayama Kazuhisa
    • Journal Title

      Biology Open

      Volume: 12 Issue: 7

    • DOI

      10.1242/bio.059976

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      Hiyamizu Shunya、Qiu Hantian、Vuolo Laura、Stevenson Nicola L.、Shak Caroline、Heesom Kate J.、Hamada Yuki、Tsurumi Yuta、Chiba Shuhei、Katoh Yohei、Stephens David J.、Nakayama Kazuhisa
    • Journal Title

      Journal of Cell Science

      Volume: 136 Issue: 5

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      加藤 洋平、千葉 秀平、中山 和久
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      生化学

      Volume: 94 Issue: 4 Pages: 616-622

    • DOI

      10.14952/SEIKAGAKU.2022.940616

    • ISSN
      0037-1017
    • Year and Date
      2022-08-25
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      Journal of Cell Science

      Volume: 136 Issue: 5

    • DOI

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      Zhou Zhuang、Katoh Yohei、Nakayama Kazuhisa
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      Volume: 33 Issue: 9

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    • URL

      http://www.pharm.kyoto-u.ac.jp/physchem/

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      https://researchmap.jp/ykatoh/

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URL: 

Published: 2022-06-20   Modified: 2024-12-25  

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