Publicly Offered Research
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
チコリンの生合成に寄与する22個のモジュールからなる非リボソーム型ペプチド合成酵素の全塩基配列（約73 kb）を決定できた。ゲノム内に非常に類似した配列が多数存在することから、紆余曲折があったが、次世代シーケンサー解析、BACクローニング、PCR等によって達成することができた。チコリンの構成アミノ酸のDLは一部決定できていなかったが、Cドメインの配列情報から、立体化学を予想することができた。現在、チコリン生合成遺伝子の大腸菌への導入を試みている。チコリン生合成遺伝子の全長配列決定に手間取っていたため、枯草菌由来のサーファクチン生合成も新たにターゲットに加えた。枯草菌でモジュール置換NRPSライブラリーを作るため、サーファクチンの２番目のモジュール遺伝子を破壊した枯草菌の作製や、導入するプラスミドの構築を達成した。したがって、枯草菌由来サーファクチン生合成遺伝子発現系を構築できた。汚泥、温泉、水田、堆肥などの土壌から抽出したメタゲノムを鋳型として、数種の組み合わせの保存アミノ酸配列の縮重プライマーを用いてPCRした。ある組み合わせにおいてNRPSと推定されるサイズのバンドが確認できた。プラスミドに導入後、数個のクローンのDNA配列を確認したところ、ほとんどがNRPS遺伝子であり、かつ配列には多様性があることを確認できた。現在、メタゲノムからモジュールライブラリーを作製し、枯草菌由来サーファクチン生合成遺伝子発現系に導入し、非天然型ペプチドの創出を行っている。
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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ChemBioChem
Volume: 14 Issue: 7 Pages: 822-825
10.1002/cbic.201300035
Biosci. Biotechnol. Biochem.
Volume: in press
130003361120
化学と生物
Volume: 50 Pages: 622-623
Tetrahedron Lett
Volume: (印刷中) Issue: 20 Pages: 2522-2524
10.1016/j.tetlet.2012.03.019
J.Am.Chem.Soc.
Volume: 133 Issue: 25 Pages: 9734-9737
10.1021/ja203779h
Volume: 133 Issue: 44 Pages: 17540-17543
10.1021/ja2060319
Org.Lett
Volume: 13 Issue: 10 Pages: 2678-2681
10.1021/ol200777d
http://researchers.adm.niigata-u.ac.jp/rs/staff/?userId=363lang=
