Publicly Offered Research
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
本年度は懸案であった再構成型翻訳システムを完成させた。HeLa細胞よりリボソーム、tRNA,eEF2を精製した。eEF1(eEF1A, eEF1Balfa, eEF1Bgamma)複合体とeRF(eRF1, eRF3)複合体はそれぞれBHK21細胞で発現し、ニッケルカラムで精製した。20種類のアミノアシルtRNA合成酵素もBHK21細胞で発現させた。そのうちGlu-ProRS, LysRS, ArgRS, GlnRS, MetRS, LeuRS, ILeRS、AspRSは複合体として精製した。以上の因子とT7RNAポリメラーゼ、ATP,GTP,CTP,UTP,アミノ酸などと混合し,システムを構築した。テンプレートはC型肝炎ウイルスのリボソーム進入部位(IRES)の下流に目的タンパク質をコードするようにした。レニラルシフェラーゼ(38kDa),Ago-2(80kDa)そしてbeta-Gal (120kDa)をコードさせるとそれぞれ全長のタンパク質が合成された。このシステムを用い、脳心筋炎ウイルスのカプシド分断のメカニズムを探った。カプシドタンパクである2A-2Bの部分はウイルス由来のプロテアーゼによって切断されず、分断のメカニズムは不明であった。ヒト細胞抽出液由来タンパク質合成系で2A2B部分を翻訳すると2Aと2Bに分断された。そのメカニズムを探るために2A2B部分を上の再構成型翻訳システムで反応させた。すると、抽出液由来タンパク質合成系と同様に2Aと2Bに分断されて合成された。このことは2A2Bの分断には特別な因子は必要でないということを示している。そして、eRFを抜いて翻訳すると、2Aは合成されたが2Bは合成されなかった。2A2B部位には翻訳終結コドンは無いが、終結因子が2A2Bの分断に必要であることがわかった。
24年度が最終年度であるため、記入しない。
All 2013 2012 2011
All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 6 results) Presentation (20 results) (of which Invited: 2 results) Book (2 results)
Protein Expression and Purification
Volume: 87 Issue: 1 Pages: 5-10
10.1016/j.pep.2012.10.001
Volume: 82 Issue: 1 Pages: 61-69
10.1016/j.pep.2011.11.010
Biotechnology Letters
Volume: 34 Issue: 1 Pages: 67-73
10.1007/s10529-011-0744-z
Volume: 34 Issue: 3 Pages: 67-73
10.1007/s10529-012-1086-1
J Biochemistry
Volume: 152 Issue: 4 Pages: 293-295
10.1093/jb/mvs091
10031166141
J.Biochemistry
Volume: 150 Issue: 4 Pages: 423-430
10.1093/jb/mvr072