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樹状細胞による末梢組織由来抗原のCD8T細胞に対する提示経路の可視化による解明

Publicly Offered Research

Project AreaMutli-dimensional fluorescence live imaging of cellular function and molecular activity
Project/Area Number 23113506
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

戸村 道夫  京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (30314321)

Project Period (FY) 2011-04-01 – 2013-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2012)
Budget Amount *help
¥11,960,000 (Direct Cost: ¥9,200,000、Indirect Cost: ¥2,760,000)
Fiscal Year 2012: ¥5,980,000 (Direct Cost: ¥4,600,000、Indirect Cost: ¥1,380,000)
Fiscal Year 2011: ¥5,980,000 (Direct Cost: ¥4,600,000、Indirect Cost: ¥1,380,000)
Keywords免疫イメージング / イメージング / 癌 / 蛍光タンパク質 / 樹状細胞 / T細胞
Outline of Annual Research Achievements

複数の特徴ある蛍光タンパク質プローブ、及びその発現マウスを用い、腫瘍移植モデルを用いて、末梢組織における死細胞の樹状細胞(DC)による貪食、貪食したDCの所属リンパ節(dLN)への移動、CD8+T細胞への抗原提示に至る一連のイベントのreal time可視化を可能にする観察系を確立した。特に従来困難であった腫瘍細胞由来タンパク質の可視化追跡、さらに腫瘍内に存在したという明確な指標を持つ細胞のdLNへの可視化追跡を可能にした。今後、確立した観察系を用いて、腫瘍内からdLNに移行した腫瘍抗原を保持するDCによる抗腫瘍CD8+T細胞活性化過程を可視化により示していく予定である。
1. 細胞死した腫瘍細胞のDCによる貪食過程の可視化:細胞死可視化蛍光タンパク質SCAT3.1を発現する細胞株の腫瘍塊を観察し、細胞死した腫瘍細胞を貪食した細胞を観察出来た。
2. 腫瘍抗原保持DCの同定及び可視化: 細胞内で分解されにくい蛍光タンパク質(FP)、及びOVAを発現する腫瘍細胞塊を形成したCD11c-YFPマウスのdLNでは、FP陽性顆粒を保持する多数のYFP陽性DCを観察出来た。
3. 腫瘍内から所属リンパ節に移動したDCの可視化: 一部のDCがKikGR(紫色光で緑色が赤色に変わる色変換蛍光タンパク質)を発現するマウスにFP-OVA/3LL腫瘍塊を作製後光照射し、腫瘍塊に浸潤しているKikGR陽性細胞を赤色にマークした。一定時間後のdLNでは、FP陽性顆粒を保持するマークしたKikGR陽性細胞を観察出来た。
4. CD8+T細胞への抗原提示過程の可視化: CD11c-KiKGRマウスにFP-OVA/3LLを皮内接種し腫瘍塊を形成させた後、青色蛍光に標識したOVA特異的TCR OT-I T細胞を移入しdLNを観察した。その結果、KiKGR、FP及び、青色のOT-I T細胞を同時に観察出来た。

Research Progress Status

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Report

(2 results)
  • 2012 Annual Research Report
  • 2011 Annual Research Report
  • Research Products

    (9 results)

All 2013 2012

All Presentation (9 results) (of which Invited: 4 results)

  • [Presentation] Approach to understand immune system based on spatiotemporal regulation of immune cells in the entire body2013

    • Author(s)
      (Michio Tomura), Kenji Kabashima, Osami Kanagawa
    • Organizer
      第38回日本微小循環学会総会 教育講演
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2013-02-08
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Invited
  • [Presentation] 新規機能可視化蛍光タンパク質を用いた免疫応答の可視化2013

    • Author(s)
      (戸村 道夫)
    • Organizer
      千里ライフサイエンスセミナー D4 細胞の“こころ”を生きた個体で観察する-- 蛍光生体イメージングの最前線
    • Place of Presentation
      大阪
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Invited
  • [Presentation] スペクトル型セルアナライザーを用いた次世代免疫研究最前線2012

    • Author(s)
      (戸村 道夫)
    • Organizer
      第41回日本免疫学会 ランチョンセミナー
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2012-12-05
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Invited
  • [Presentation] Drastic increase of DC movement from immunizesd site and rapid replacement of antigen-carrying DC in the draining lymph node sustain initiation of T cell proliferation2012

    • Author(s)
      (Michio Tomura), Asako Sakaue-Sawano, Atushi Miyawaki, Osami Kanagawa
    • Organizer
      第41回日本免疫学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2012-12-05
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] Separation and simultaneous detection of fluorescent proteins and adjacent fluorochromes by spectral flow cytometer2012

    • Author(s)
      Koji Futamura, Motohiro Furuki, (Michio Tomura)
    • Organizer
      第41回日本免疫学会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2012-12-05
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] Drastic increase of DC movement from immunizesd site and rapid replacement of antigen-carrying DC in the draining lymph node sustain initiation of T cell proliferation2012

    • Author(s)
      (Michio Tomura), Asako Sawano, Atsushi Miyawaki, Osami Kanagawa
    • Organizer
      12th International symposium on dendritic cells
    • Place of Presentation
      Daegu, Korea
    • Year and Date
      2012-10-07
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] 色変換蛍光タンパク質「カエデ」発現マウスを用いた全身レベルの免疫細胞動態解明による免疫系の理解2012

    • Author(s)
      (戸村 道夫)
    • Organizer
      第36回 日本リンパ学会総会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2012-06-29
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Invited
  • [Presentation] Rapid replacement by apoptosis in the draining LN sustains dynamics of skin-migratory dendritic cells in steady state.2012

    • Author(s)
      (Michio Tomura), Kenji Kabashima, Osami Kanagawa
    • Organizer
      3rd Synthetic Immunology
    • Place of Presentation
      Kyoto, Japan
    • Year and Date
      2012-05-18
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] Rapid replacement by apoptosis in the draining lymph nodes sustains dynamics of skin-migratory dendritic cells in the steady state.2012

    • Author(s)
      (Michio Tomura), Kenji Kabashima, Osami Kanagawa
    • Organizer
      99th Annual meeting of the American association of immunologist
    • Place of Presentation
      Boston, USA
    • Year and Date
      2012-05-04
    • Related Report
      2012 Annual Research Report

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Published: 2011-04-06   Modified: 2018-03-28  

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