Publicly Offered Research
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
本研究では、摂食調節への関与を裏付ける証拠がありながらも「受容体－内在性リガンド」の組み合わせが未だ解決しないシステムを標的とする。すなわち摂食に関与する①脳に局在するオーファン受容体BRS3の内在性リガンド同定 ②視床下部に局在するオーファンペプチドCARTに対する受容体同定を目指した。①海洋微生物の多様性に着目し、カイメン共在細菌群から抽出したDNAをライブラリー化したメタゲノムライブラリーを探索資源とした。まず、10万クローンの中から、ペプチド新生関連遺伝子を持つ120クローンを選択した。次に、BRS3発現培養細胞に各ライブラリークローン由来物質（熱処理した大腸菌培養上清）を適用し、細胞内シグナル応答の評価を行った。クローンの培養条件（メディウム組成、温度、時間、培養容器等）を様々に検討した結果、3クローンの培養上清がBRS3発現系においてCa2+シグナル陽性反応を示した。そこで次に、疎水性クロマトグラフィーによる分画を行い、精製2段階目においてクローン42由来のあるフラクションのCa2+シグナル動員活性が再現性良く得られることを見出した。②種々の神経系由来細胞株にCARTをアプライし、鍵となる活性型リン酸化酵素を検出することによりスクリーニングを行った。その結果、CART55-102の添加によりERK活性が亢進する海馬由来の神経細胞株を同定した。カイメン共生細菌から分離された有用物質・環状ペプチドは、治療に多大に貢献している製剤も多いが、メタゲノムを用いたGPCRのリガンドスクリーニングはこれまでに報告はない。今後も引き続きCART受容体内在性発現細胞とともに、申請者オリジナルの展開が期待できる。
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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All Journal Article (8 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (4 results) (of which Invited: 2 results) Remarks (1 results)
General and Comparative Endocrinology
Volume: 188 Pages: 159-165
10.1016/j.ygcen.2013.02.020
Front. Endocrinology
Volume: 3.147 Pages: 1-10
10.3389/fendo.2012.00147
日本薬理学会編集「実践治療薬」
Volume: 1 Pages: 273-280
Regulatory Peptides. 169, 6-12
Volume: 169 Pages: 6-12
生体の科学
Volume: 62 Pages: 37-43
実験医学増刊号「代謝・内分泌ネットワークと医薬応用」
Volume: 29 Pages: 14-22
Volume: 29 Pages: 54-59
Volume: 29 Pages: 80-85
http://home.hiroshima-u.ac.jp/yumist/index.html
