抗原トリミングアミノペプチダーゼの作用発現メカニズムと制御

• Project Area: HLA polymorphism, disease and evolution
• Project/Area Number: 23133504
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 服部 明 京都大学, 薬学研究科(研究院), 准教授 (50300893)
• Project Period (FY): 2011-04-01 – 2013-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2012)
• Budget Amount: ¥6,760,000 (Direct Cost: ¥5,200,000、Indirect Cost: ¥1,560,000); Fiscal Year 2012: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000); Fiscal Year 2011: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000)
• Keywords: アミノペプチダーゼ / 小胞体アミノペプチダーゼ / 抗原ペプチド / 強直性脊椎炎 / 一塩基多型 / HLA / マクロファージ / 小胞体貯留

Outline of Annual Research Achievements

強直性脊椎炎（AS)感受性ERAP1依存的なHLA-B27提示リガンドの同定に向けた培養細胞株を作製した。テトラサイクリン誘導体（Dox）により遺伝子発現をコントロールすることが可能な細胞株Tet-off HEK293細胞を用い、まずその内在性ERAP1の発現量をshRNAによって低下させた細胞株HEK293/koERAP1細胞を作製した。次いでHEK293/koERAP1細胞にx6 Hisタグを付加したHLA-B*27:05遺伝子を安定に発現するHEK293/koERAP1+B27細胞を樹立した。最後に別途作成したshRNA耐性となるように同義置換を導入したAS感受性ならびに耐性ERAP1遺伝子をDox感受性プロモーターの下流に挿入したプラスミドをHEK293/koERAP1+B27細胞に導入することで、HEK293/koERAP1+B27+rsiERAP1（WT/K528R/Q730E）細胞株を樹立した。本細胞株を用いて各SNP型ERAP1の発現誘導に伴う細胞表面HLA-B27の変化を解析した結果、いずれの場合も細胞表面HLA-B27発現量が低下していたが、AS耐性型である野生型ERAP1の場合がHLA-B27量の低下が最も大きく、AS感受性であるK528RならびにQ730E ERAP1では小さな変化しか認められなかった。これらの結果から、樹立した細胞株がAS感受性ERAP1依存的なHLA-B27リガンドの同定に適していることならびに各SNP型酵素が作り出すHLA-B27リガンドのレパトアが大きく異なっていることが示唆された。

Research Progress Status

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Exon 10 Coding Sequence Is Important for Endoplasmic Reticulum Retention of Endoplasmic Reticulum Aminopeptidase 1 (2012)
  • Author(s): Hattori A, Goto Y & Tsujimoto M
  • Journal Title: Biological and Pharmaceutical Bulletin Volume: 35 Issue: 4 Pages: 601-605
  • DOI: 10.1248/bpb.35.601
  • NAID: 130001872211
  • ISSN: 0918-6158, 1347-5215
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Laeverin/amino peptidase Q induces trophoblast invasion during human early placentation (2012)
  • Author(s): Horie A, Fujiwara H, Sato Y, Suginami K, Matsumoto H, Maruyama M, Konishi I, Hattori A.
  • Journal Title: Hum Reprod Volume: 27 Issue: 5 Pages: 1267-76
  • DOI: 10.1093/humrep/des068
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Involvement of Glutamine-238 in the Substrate Specificity of Human Laeverin/Aminopeptidase Q (2011)
  • Author(s): Hattori A., Goto Y., et al
  • Journal Title: Biological and Pharmaceutical Bulletin Volume: 34 Issue: 1 Pages: 24-27
  • DOI: 10.1248/bpb.34.24
  • NAID: 130000402257
  • ISSN: 0918-6158, 1347-5215
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Coding single nucleotide polymorphisms of endoplasmic reticulum aminopeptidase 1 can affect antigenic peptide generation in vitro by influencing basic enzymatic properties of the enzyme (2011)
  • Author(s): Hattori A., Evnouchidou I., et al
  • Journal Title: J Immunol Volume: 186 Issue: 4 Pages: 1909-13
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1003337
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Probing the S1 specificity pocket of the aminopeptidases that generate antigenic peptides (2011)
  • Author(s): Hattori A., Zervoudi E., et al
  • Journal Title: Biochem J Volume: 435 Issue: 2 Pages: 411-420
  • DOI: 10.1042/bj20102049
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Secretion of endoplasmic reticulum aminopeptidase 1 is involved in the activation of macrophages induced by lipopolysaccharide and interferon-gamma (2011)
  • Author(s): Hattori A., Goto Y., et al
  • Journal Title: J Biol Chem Volume: 286 Issue: 24 Pages: 21906-21914
  • DOI: 10.1074/jbc.m111.239111
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The Arabidopsis aminopeptidase LAP2 regulates plant growth, leaf longevity and stress response (2011)
  • Author(s): Hattori A., Waditee-Sirisattha R., et al
  • Journal Title: New Phytol Volume: 191 Issue: 4 Pages: 958-969
  • DOI: 10.1111/j.1469-8137.2011.03758.x
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Role of the Arabidopsis leucine aminopeptidase 2 (2011)
  • Author(s): Hattori A., Waditee-Sirisattha R., et al
  • Journal Title: Plant Signal Behav Volume: 6 Pages: 1581-1583
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 小胞体アミノペプチダーゼの分泌機構 (2011)
  • Author(s): 服部明、後藤芳邦, 他
  • Organizer: 第84回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館(京都府)
  • Year and Date: 2011-09-24
• [Presentation] ヒト絨毛外栄養膜細胞に特異的な新規aminopeptidase "laeverin"の同定とその機能解析 (2011)
  • Author(s): 服部明、堀江昭史, 他
  • Organizer: 第16回日本病態プロテアーゼ学会学術集会
  • Place of Presentation: 千里ライフサイエンスセンタービル(大阪府)
  • Year and Date: 2011-08-26
• [Book] Handbook of Proteolytic Enzymes (Aminopeptidase Q/Laeverin) (2013)
  • Author(s): Akira Hattori
  • Total Pages: 3
  • Publisher: Elsevier