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UHRF1タンパク質の天然変性領域の機能-構造解析

Publicly Offered Research

Project AreaTarget recognition and expression mechanism of intrinsically disordered protein
Project/Area Number 24113711
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionYokohama City University (2013)
Kyoto University (2012)

Principal Investigator

有田 恭平  横浜市立大学, 生命医科学研究科, 准教授 (40549648)

Project Period (FY) 2012-04-01 – 2014-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2013)
Budget Amount *help
¥11,180,000 (Direct Cost: ¥8,600,000、Indirect Cost: ¥2,580,000)
Fiscal Year 2013: ¥5,590,000 (Direct Cost: ¥4,300,000、Indirect Cost: ¥1,290,000)
Fiscal Year 2012: ¥5,590,000 (Direct Cost: ¥4,300,000、Indirect Cost: ¥1,290,000)
Keywords天然変性タンパク質 / UHRF1 / エピジェネティクス
Research Abstract

DNAのメチル化やヒストンの翻訳後修飾はエピジェネティクスな情報の担い手であり、真核生物の初期胚の形成・発生や細胞分化、遺伝子発現制御に極めて重要な働きをしている。UHRF1はヒストン修飾の認識とDNAメチル化の維持に関与しており、エピジェネティクスな機構を統合する因子であると考えられている。UHRF1は5つの機能ドメインを有している。各ドメイン間のlinkerは天然変性領域であると予測されているがUHRF1のエピジェネティクスな機能に重要な働きをしている。
本年度はDNAメチル化の維持機構に関与するUHRF1とDnmt1に注目し、これら2つの因子の相互作用様式の解明を試みた。特にUHRF1の天然変性領域の機能を構造生物学的, 生化学、細胞生物学的な手法を用いて明らかにすることを目的とした。
Dnmt1のRFTSとの相互作用にUHRF1のリンカー領域が寄与していることを明らかにした。さらにこの結合を等温滴定型カロリーメトリーを用いて、定量的に解析した。NMRによる滴定実験から、リンカーのどのアミノ酸残基がRFTSとの相互作用に寄与しているかを明らかにし、その構造生物学的な情報を得ることに成功した。実際に、相互作用に関与するアミノ酸残基を置換した変異体では、RFTSとの親和性が落ちることや結合比が大きく変化し、特異的に相互作用ができなくなっていることが明らかになった。これらの実験結果を踏まえて、原子レベルでの構造情報からRFTSとUHRF1の相互作用の詳細な機構の解明のために、複合体の結晶化を行った。現在結晶はまだ得られていないが、今後さらに相互作用部位の精密化や結晶化条件の探索を行うことにより複合体のX線結晶構造解析を目指す予定である。

Current Status of Research Progress
Reason

25年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

25年度が最終年度であるため、記入しない。

Report

(2 results)
  • 2013 Annual Research Report
  • 2012 Annual Research Report
  • Research Products

    (11 results)

All 2014 2013 2012 Other

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 7 results,  Open Access: 3 results) Presentation (1 results) Remarks (3 results)

  • [Journal Article] The DNA methyltransferase Dnmt1 directly interacts with the SET and RING finger-associated (SRA) domain of the multifunctional protein Uhrf1 to facilitate accession of the catalytic center to hemi-methylated DNA2014

    • Author(s)
      Berkyurek AC, Suetake I, Arita K, Takeshita K, Nakagawa A, Shirakawa M, Tajima S
    • Journal Title

      J Biol Chem

      Volume: 289(1) Issue: 1 Pages: 379-86

    • DOI

      10.1074/jbc.m113.523209

    • NAID

      120006770872

    • Related Report
      2013 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Uhrf1-dependent H3K23 ubiquitylation couples maintenance DNA methylation and replication2013

    • Author(s)
      Nishiyama, A
    • Journal Title

      Nature

      Volume: 502 Issue: 7470 Pages: 249-253

    • DOI

      10.1038/nature12488

    • Related Report
      2013 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Development of Fluorogenic Probes for Quick No-Wash Live-Cell Imaging of Intracellular Proteins2013

    • Author(s)
      Y. Hori, T. Norinobu, M. Sato, K. Arita, S. Shirakawa & K. Kikuchi
    • Journal Title

      J. Am. Chem. Soc

      Volume: 135 Issue: 33 Pages: 12360-12365

    • DOI

      10.1021/ja405745v

    • Related Report
      2013 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Quantitative comparison of protein dynamics in live cells and in vitro by in-cell (19)F-NMR.2013

    • Author(s)
      Takaoka Y, Kioi Y, Morito A, Otani J, Arita K, Ashihara E, Ariyoshi M, Tochio H, Shirakawa M, Hamachi I.
    • Journal Title

      Chem Commun

      Volume: 49 Issue: 27 Pages: 2801-2803

    • DOI

      10.1039/c3cc39205h

    • Related Report
      2013 Annual Research Report 2012 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Structural basis of the versatile DNA recognition ability of the methyl-CpG binding domain of methyl-CpG binding domain protein 4.2013

    • Author(s)
      Otani, J., Arita, K., Kato, T., Kinoshita, M., Kimura, H., Suetake, I., Tajima, S., Ariyoshi, M., Shirakawa, M.
    • Journal Title

      J Biol. Chem.

      Volume: 288 Issue: 9 Pages: 6351-6362

    • DOI

      10.1074/jbc.m112.431098

    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Lysyl 5-Hydroxylation, a Novel Histone Modification, by Jumonji Domain Containing 6 (JMJD6)2013

    • Author(s)
      M. Unoki, A. Masuda, N. Dohmae, K. Arita, M. Yoshimatsu, Y. Iwai, Y. Fukui, K. Ueda, R. Hamamoto, M. Shirakawa, H. Sasaki, and Y. Nakamura
    • Journal Title

      The Journal of biological chemistry

      Volume: 288(9) Issue: 9 Pages: 6053-62

    • DOI

      10.1074/jbc.m112.433284

    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Recognition of modification status on a histone H3 tail by linked histone reader modules of the epigenetic regulator UHRF12012

    • Author(s)
      K.Arita, S.Isogai, T.Oda, M.Unoki, K.Sugita, N.Sekiyama, K.Kuwata, R.Hamamoto, H.Tochio, M.Sato, M.Ariyoshi, and M.Shirakawa
    • Journal Title

      Proc. Natl. Acad. Sci. USA

      Volume: 109 Issue: 32 Pages: 12950-12955

    • DOI

      10.1073/pnas.1203701109

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      2012 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Molecular Mechanism of Methylated DNA Recognition by SRA Domain of UHRF22012

    • Author(s)
      Terumitsu Murakami, Kyohei Arita , Mariko Ariyoshi , Hidehito Tochio , Masahiro Shirakawa
    • Organizer
      第35回分子生物学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2012-12-11
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Remarks] 横浜市立大学構造生物学研究室

    • URL

      http://www-mls.tsurumi.yokohama-cu.ac.jp/lab/xtal-mls.html

    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Remarks] 京都大学 工学研究科 生体分子機能化学講座

    • URL

      http://www.moleng.kyoto-u.ac.jp/~moleng_01/

    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Remarks] 横浜市立大学 生命医科学研究科 構造生物学研究室

    • URL

      http://www-mls.tsurumi.yokohama-cu.ac.jp/xtal-mls/index.html

    • Related Report
      2012 Annual Research Report

URL: 

Published: 2013-05-15   Modified: 2019-07-29  

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