架橋性核酸を用いた非コードRNA作用マシナリーの機能解析
Publicly Offered Research
Project Area | Functional machinery for non-coding RNAs |
Project/Area Number |
24115701
|
Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
|
Allocation Type | Single-year Grants |
Review Section |
Biological Sciences
|
Research Institution | Nagoya University (2013) Tohoku University (2012) |
Principal Investigator |
萩原 伸也 名古屋大学, 理学研究科(WPI), 准教授 (80373348)
|
Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2014-03-31
|
Project Status |
Completed (Fiscal Year 2013)
|
Budget Amount *help |
¥9,360,000 (Direct Cost: ¥7,200,000、Indirect Cost: ¥2,160,000)
Fiscal Year 2013: ¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2012: ¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
|
Keywords | miRNA / 架橋性核酸 |
Research Abstract |
本研究課題では、申請者の開発した架橋性核酸の特色である強い結合性を活かし、非コードRNA結合サイトのマスキングという新しい方法論を構築し、効率的な非コードRNAの調節法の開発をめざした。「MBSマスキングによるmiRNAの機能制御」が実際に細胞内で働くことを検証するため、架橋性核酸と反応させたmRNAを細胞へトランスフェクションし、タンパク質への翻訳量を定量した。評価系には、Fireflyルシフェラーゼの3’-UTRにMBSを導入したmRNAを用いた。miR-21を高発現するHela細胞へmRNAを導入し、ルシフェラーゼ活性を定量したところ、miR-21結合サイトを3’-UTRに導入したmRNAは、ルシフェラーゼの発現量が3%にまで低下した。これに対し、予め架橋させたmRNAをHela細胞へ導入した際には、miR-21結合サイトを持たないmRNAと同等のルシフェラーゼ活性が見られた。また、架橋性核酸塩基の代わりに通常の核酸塩基を有するASOでは、同様のmiRNA阻害効果は見られなかった。これらの結果から、架橋性核酸のmiRNA結合サイトへの架橋形成は、細胞内のmiRNAを効率よく阻害することが明らかになった。さらに、内在性・外在性の様々なmiRNAに対してMBSマスキングの効果を評価したところ、殆どのmiRNAに対して阻害効果が見られた。以上のことから、本架橋性核酸はmiRNA機能の標的遺伝子選択的な阻害、未知のmiRNAの機能解明にむけて有用な分子ツールとして期待される。今後検討すべき点として、架橋性核酸の細胞内における局在、安定性、細胞導入法などがあげられる。
|
Current Status of Research Progress |
Reason
25年度が最終年度であるため、記入しない。
|
Strategy for Future Research Activity |
25年度が最終年度であるため、記入しない。
|
Report
(2 results)
Research Products
(4 results)
-
-
[Journal Article] Production of truncated protein by the crosslink formation of mRNA with 2’-OMe oligoribonucleotide containing 2-amino-6-vinylpurine2012
Author(s)
Hagihara, S., Kusano, S., Lin, W.C., Chao, X.G., Hori, T., Imoto, S., Nagatsugi, F.
-
Journal Title
Bioorg. Med. Chem. Lett.
Volume: 22
Issue: 12
Pages: 3870-3872
DOI
Related Report
Peer Reviewed
-
-