Publicly Offered Research
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
ATPを可視化するために作出したGO-ATeam2可視化マウス、GO-ATeam1可視化マウスの受精後16日目のマウス胚から樹立したMEF細胞を用いてATP量とGO-ATeamから発せられるFRET/GFP ratio値の相関性を調べるとGO-ATeam2 は0.3-5mMのATP濃度の範囲で、またGO-ATeam1は2-20mMのATP濃度の範囲で直線状の相関性を示すことを明らかにした。このことより、このマウスを用いればそれぞれのATP濃度においてFRET ratio値としてATP濃度を詳細に可視化できる事がわかった。このGO-ATeam2可視化マウス、GO-ATeam1可視化マウスを用いて受精後1日目から10日目までの胚にてATPの細胞内局在、各細胞種でのATP量の定量測定と経時変化測定、またマウス成体での臓器毎・細胞毎・細胞内局在を定量的に測定できるかを検討した結果、subcellularレベルでATP量の分布を調べる事が可能である事が示された。細胞内でATP量の変化を詳細に調べる事ができる両方のATP可視化マウスを用いて、glycolisisおよびoxidative phosphorylationを阻害する試薬を添加してATPの経時的変化を確認すると、濃度・時間依存的な変化を観察する事ができた。またここで測定した濃度はLuciferase法にて測定した場合と相関性を示す事ができた。更に、卵割時や低酸素時・疾患時におけるATPの産生と変化に対しても重要な知見を得る事ができた。
25年度が最終年度であるため、記入しない。
All 2014 2012
All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)
Nature Communications
Volume: 5 Issue: 1 Pages: 3678-3678
10.1038/ncomms4678
Developmental Cell
Volume: 22 Issue: 6 Pages: 1163-1175
10.1016/j.devcel.2012.05.009