振動分光法による過渡的膜タンパク質複合体の解析

• Project Area: Integrative understanding of biological processes mediated by transient macromolecular complexes; New technology for visualizing physiologically metastable states.
• Project/Area Number: 24121712
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Complex systems
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 須藤 雄気 名古屋大学, 理学(系)研究科(研究院), 准教授 (10452202)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2014-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2013)
• Budget Amount: ¥11,310,000 (Direct Cost: ¥8,700,000、Indirect Cost: ¥2,610,000); Fiscal Year 2013: ¥5,720,000 (Direct Cost: ¥4,400,000、Indirect Cost: ¥1,320,000); Fiscal Year 2012: ¥5,590,000 (Direct Cost: ¥4,300,000、Indirect Cost: ¥1,290,000)
• Keywords: 生物物理 / 情報伝達 / 分子認識 / 構造変化 / 光生物 / 分光法 / 膜タンパク質 / 生物物理学 / 振動分光法 / 光生物学 / 赤外 / ラマン

Research Abstract

細胞内外の情報や物質のやり取りを行う”膜タンパク質”は、全タンパク質分子の約20%を占め、生命活動に必須である。一方で、細胞膜中で機能するため取り扱いが難しい、発現量が少ないなどの理由からそのメカニズムの理解は遅れている。我々は、光受容体・ロドプシンと伝達膜タンパク質の“膜分子複合体の過渡的変化”を様々な手法により解析している。このうち、赤外分光(FTIR) 法やラマン分光法に代表される振動分光法は、分子振動を鋭敏に捉える手法で、側鎖, 主鎖, 低分子(イオンや水など)の微細構造変化を捉えることができ、X線結晶構造解析やNMR解析では得ることが難しい情報を取得することができる。本研究では以下の４点について研究を行い、成果を得た。本研究を通じて、膜蛋白質解析のボトルネックである、試料調製法や解析手法を確立できたと考えている。
(1) 試料調製法の確立 [Sudo et al. 2013, J. Biol. Chem., Tsukamoto et al., 2013, J. Biol. Chem.], (2) 時間分解FTIR法による分子構造変化 [Furutani et al. 2013, J. Phys. Chem. B], (3) 時間分解ラマン分光法による分子構造変化 [Sudo et al. 2014, J. Phys. Chem. B], (4) 光照射固体NMR分光法による発色団構造変化 [Yomoda et al., 2014, Angew. Chem. Int. Ed.], (5) 全反射型FTIR法による2次構造測定 [東京大学船津研究室との共同研究]。

Current Status of Research Progress

Reason

25年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

25年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Color discriminating retinal configurations of sensory rhodopsin I by photo-irradiation solid state NMR spectroscopy. (2014)
  • Author(s): Yornoda, H., Makino, Y., Tomonaga, Y., Hidaka, T., Kawamura, I., Okitsu, T., Wada, A., Sudo, Y., Naito, A.
  • Journal Title: Angew. Chem. Int. Ed. Volume: (印刷中) Issue: 27 Pages: 7080-7084
  • DOI: 10.1002/ange.201309258
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The early steps in the photocycle of a photosensor protein sensory rhodopsin I from Salinibacter ruber (2014)
  • Author(s): Sudo, Y., Mizuno, M., Wei, Z., Takeuchi S., Tahara. T., Mizutani. Y.
  • Journal Title: J. Phys. Chem. B Volume: 118 Issue: 6 Pages: 1510-1518
  • DOI: 10.1021/jp4112662
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Thermal and spectroscopic characterization of a proton pumping rhodopsin from an extreme thermophile (2013)
  • Author(s): Tsukamoto, T., Inoue, K., Kandori, H., Sudo, Y.
  • Journal Title: J. Biol. Chem. Volume: 288 Issue: 30 Pages: 21581-21592
  • DOI: 10.1074/jbc.m113.479394
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A blue-shifted light-driven proton pump for neural silencing (2013)
  • Author(s): Sudo, Y., Okazaki, A., Ono, H., Yagasaki, J., Sugo, S., Kamiya, M., Reissig, L., Inoue, K., Ihara, K., Kandori, H., Takagi, S., Hayashi, S.
  • Journal Title: J. Biol. Chem. Volume: 288 Issue: 28 Pages: 20624-20632
  • DOI: 10.1074/jbc.m113.475533
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Investigation of the chromophore binding cavity in the 11-cis acceptable microbial rhodopsin MR (2013)
  • Author(s): Mori, A., Yagasaki, J., Homma, M., Reissig, L., & *Sudo, Y.
  • Journal Title: Chem. Phys. Volume: 419 Pages: 23-29
  • DOI: 10.1016/j.chemphys.2012.11.020
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Expression, purification and biochemical characterization of the cytoplasmic loop of PomA, a stator component of the Na⁺ driven flagellar motor (2013)
  • Author(s): Abe R
  • Journal Title: BIOPHYSICS Volume: 9 Issue: 0 Pages: 21-29
  • DOI: 10.2142/biophysics.9.21
  • NAID: 130003366026
  • ISSN: 1349-2942
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Large spectral change due to amide modes of a β-sheet upon the formation of an early photointermediate of middle rhodopsin (2013)
  • Author(s): Furutani, Y., Okitsu, T., Reissig, L., Mizuno, M., Homma, M., Wada, A., Mizutani, Y., Sudo, Y.
  • Journal Title: J. Phys. Chem. B Volume: 117 Issue: 13 Pages: 3449-3458
  • DOI: 10.1021/jp308765t
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] "The influence of halide binding on the hydrogen bonding network in the active site of Salinibacter sensory rhodopsin I" (2012)
  • Author(s): L. Reissig, T. Iwata, T. Kikukawa, M. Demura, N. Kamo, H. Kandori and Y. Sudo
  • Journal Title: Biochemistry Volume: 51 Issue: 44 Pages: 8802-8813
  • DOI: 10.1021/bi3009592
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Photo-induced regulation of the chromatic adaptive gene expression by Anabaena sensory rhodopsin (2012)
  • Author(s): Irieda, H., Morita, T., Maki, K., Homma, M., Aiba, H., & *Sudo, Y.
  • Journal Title: J. Biol. Chem. Volume: 287 Issue: 39 Pages: 32485-32493
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.390864
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Optical Silencing of C. elegans Cells with Arch Proton Pump (2012)
  • Author(s): Okazaki A, Sudo Y, Takagi S
  • Journal Title: PLoS ONE Volume: 7(5) Issue: 5 Pages: e35370-e35370
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0035370
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] "Absorption spectra and photochemical reactions in a unique photoactive protein, middle rhodopsin MR" (2012)
  • Author(s): K. Inoue, L. Reissig, M. Sakai, S. Kobayashi, M. Homma, M. Fujii, H. Kandori, and Y. Sudo
  • Journal Title: J. Phys. Chem. B Volume: 116 Issue: 20 Pages: 5888-5899
  • DOI: 10.1021/jp302357m
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Photobiophysical chemistry: What should we learn from retinal proteins? (2014)
  • Author(s): Sudo, Y.
  • Organizer: iCeMS symposium on Mesoscopic Chemical Biology: Integrated Chemical-Physical Systems Towards Cell Control
  • Place of Presentation: Kyoto
  • Invited
• [Presentation] 微生物型レチナールタンパク質の非常識で未来を拓く (2013)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 分子科学研究所研究会「ロドプシン研究の故きを温ねて新しきを知る」
  • Place of Presentation: 岡崎
  • Invited
• [Presentation] 光受容レチナールタンパク質の常識と非常識 (2013)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 東京工業大学第1回生体分子専攻・若手コロキウム
  • Place of Presentation: 横浜
  • Invited
• [Presentation] 微生物型レチナールタンパク質の理解と利用 (2013)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 大阪市立大学セミナー
  • Place of Presentation: 大阪
  • Invited
• [Presentation] ロドプシンの、ロドプシンによる、ロドプシンのための蛋白質科学 (2013)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 大阪大学蛋白研セミナー
  • Place of Presentation: 大阪
  • Invited
• [Presentation] 光操作技術の基盤となるロドプシン分子の多様性と可能性 (2012)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 第7回・NIBBバイオイメージングフォーラム
  • Place of Presentation: 自然科学研究機構 基礎生物学研究所（愛知県）
  • Year and Date: 2012-11-26
  • Invited
• [Presentation] 分子からのボトムアップ研究で拓く光細胞・個体操作 (2012)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 細胞を創る」研究会5.0
  • Place of Presentation: 東京工業大学（神奈川県）
  • Year and Date: 2012-11-21
  • Invited
• [Presentation] 微生物の光利用と光制御ツール開発 (2012)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 「次世代の光の利用と物質材料・生命機能」研究会
  • Place of Presentation: 早稲田大学（東京都）
  • Year and Date: 2012-10-20
  • Invited
• [Presentation] Functional diversity of sensory rhodopsins from microbes (2012)
  • Author(s): Sudo, Y.
  • Organizer: 15th International Conference on Retinal Proteins
  • Place of Presentation: Monte Verita (Ascona, Switzerland)
  • Year and Date: 2012-09-30
  • Invited
• [Presentation] 「Simple is the first? 」: 微生物由来レチナール蛋白質の分子進化と多様性 (2012)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 第14回日本進化学会年会
  • Place of Presentation: 首都大学東京（東京都）
  • Year and Date: 2012-08-21
  • Invited
• [Presentation] 微生物型光受容タンパク質の解析と光制御ツール開発 (2012)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 第17回日本光生物学協会年会
  • Place of Presentation: 大阪大学（大阪府）
  • Year and Date: 2012-08-18
  • Invited
• [Presentation] 光生物物理学-基礎研究のススメ。渇望される薬学部生 (2012)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 北海道大学薬学部 第19回「先輩と語る」講演会
  • Place of Presentation: 北海道大学（北海道）
  • Year and Date: 2012-07-02
  • Invited
• [Book] Molecular and evolutionary aspects of microbial sensory rhodopsins (2014)
  • Author(s): Inoue, K., Tsukamoto, T., & *Sudo, Y.
  • Total Pages: 16
  • Publisher: Biochim. Biophys. Acta
• [Book] Sensory rhodopsins (2014)
  • Author(s): Tsukamoto, T., & *Sudo, Y.
  • Total Pages: 7
  • Publisher: In: eLS. John Wiley & Sons, Ltd: Chichester.
• [Book] オプトジェネティクス-光工学と遺伝学による行動制御技術の最前線（分担執筆） (2013)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Total Pages: 324
  • Publisher: エヌ・ティー・エス