GluRδ2-Cbln1-NRXN複合体によるシナプス形成機構の構造基盤の解明
Publicly Offered Research
| Project Area | Structural basis of cell-signalling complexes mediating signal perception, transduction and responses |
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| Project/Area Number |
25121710
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Review Section |
Biological Sciences
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
植村 健 信州大学, 学術研究院医学系, 准教授 (00372368)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2014)
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| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2014: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
Fiscal Year 2013: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
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| Keywords | 脳・神経 / シナプス形成 / 小脳 / 蛋白質複合体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
シナプス形成機構の構造基盤に基づく厳密な理解と制御機構の解明を目指し、GluRδ2-Cbln1-NRXN複合体の立体構造の解析を試みた。昨年度までにGluRδ2-NTD (N-terminal domain)およびCbln1の立体構造を決定しており、その立体構造の情報を元に部位特異的変異体のシナプス誘導能評価している。本年度はこれらの結果を確認するとともにシナプス誘導能評価に加え、GluRδ2-NTD部位特異的変異体とCbln1の結合能を解析した。その結果、シナプス誘導能が消失している変異体については、同時にCbln1との結合能が消失していることが確認された。特に、GluRδ2のIle11、Leu327、Trp332で構成される疎水性のポケットとそれに隣接するArg330がCbln1と相互作用に関わることが示唆された。さらにCbln1とGluRδ2の相互作用部位を探索するために、蛋白質架橋剤をもちいてCbln1-GluRδ2複合体を架橋し、トリプシン消化後の断片を質量分析装置で解析することで相互作用部位の同定を試みた。２種類の異なった蛋白質架橋剤を用いてCbln1とGluRδ2とが共有結合で架橋された複数のイソペプチドを同定された。Cbln1とNRXN1βについても同様の解析を行い、質量分析によってCbln1とNRXN1βの相互作用部位も同定した。さらにゲルろ過クロマトグラフィー（SEC）－多角度レーザー光散乱（MALS）をもちいた解析により、溶液中ではCbln1が６量体を形成しているこを、GluRδ2-NTDは２量体を形成していることを確認した。これらの情報を元に複合体の結合モデルを構築した。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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Report
(2 results)
Research Products
(9 results)
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[Journal Article] Mechanisms of splicing-dependent trans-synaptic adhesion by PTPδ-IL1RAPL1/IL-1RAcP for synaptic differentiation2015
Author(s)
Yamagata A., Yoshida, T., Sato, Y., Goto-Ito, S., Uemura, T., Maeda, A., Shiroshima, T., Iwasawa-Okamoto, S., Mori, H., Mishina, M., Fukai , S.
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Journal Title
Nature Communications
Volume: 6
Issue: 1
Pages: 6926-6926
DOI
Related Report
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Electron microscopy of primary cell cultures in solution and correlative optical microscopy using ASEM2014
Author(s)
K.Hirano, T.Kinoshita, T.Uemura, H.Motohashi, Y.Watanabe, T.Ebihara, H.Nishiyama, M.Sato, M.Suga, Y.Maruyama, N.M.Tsuji, M.amamoto, S.Nishihara, C.Sato
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Journal Title
Ultramicroscopy
Volume: 143
Pages: 52-66
DOI
Related Report
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] The Atmospheric Scanning Electron Microscope (ASEM) Observes Axonal Segmentation and Synaptic Induction in Solution2014
Author(s)
佐藤 主税, 木下 貴明, 植村 健, 平野 和己, 川田 正晃, 西山英利, 佐藤 真理, 海老原 達彦, 須賀三雄, 西原祥子
Organizer
2014 Microscopy & Microanalysis meeting
Place of Presentation
ハートフォード, アメリカ合衆国,
Year and Date
2014-08-05
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