Publicly Offered Research
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
本研究の目的は真核生物の染色体分配装置の立体構造と機能をタンパク質レベルから細胞レベルに至る多面的な解析を行い、その分子機構を明らかにすることにある。今年度はCENP-L-CENP-N複合体とCENP-CのNMR解析に向けたサンプル調整を行った。N15とC13ラベルしたサンプルを調整したところ、サンプルの不安定性およびオリゴマー形成のためNMRに必要なタンパク質濃度まで濃縮することができずNMR測定できなかった。一方、より小さなコンストラクトでは４度で2週間ほど安定であった。現在はこの試料を用いて立体構造解析、相互作用領域特定のためNMR解析を行っている。一方、細胞を用いた解析ではCENP-Cをノックアウトしたニワトリ細胞にドメインを欠失したCENP-Cを導入し、その際に他の染色体分配因子がどのように局在し、そのレベルが変化するかを観察した。その結果、CENP-CのN末端1/3を欠失したコンストラクトではCENP-Hのキネトコア局在レベルが低下した。一方、C末端1/3のCENP-Cコンストラクトではそのような低下は見られなかった。別の染色体分配因子Mis12の場合はN末端1/3欠失したコンストラクトおよびC末端1/3コンストラクトいずれにおいてもキネトコア局在レベルは観測できなかった。このような違いはCENP-HとMis12がCENP-Cに結合する領域及びその制御が異なっていることを意味する。現在はこのような相互作用に関わる領域の立体構造解析を行っている。
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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Nucleic Acids Research
Volume: 42 Issue: 3 Pages: 1644-1655
10.1093/nar/gkt1124
Nucleic Acids Res
Volume: 41 Issue: 12 Pages: 6149-6160
10.1093/nar/gkt303
