脊椎動物キネトコア複合体の構造細胞生物学
Publicly Offered Research
| Project Area | Structural basis of cell-signalling complexes mediating signal perception, transduction and responses |
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| Project/Area Number |
25121735
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Review Section |
Biological Sciences
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| Research Institution | National Institute of Genetics |
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Principal Investigator |
西野 達哉 国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系, 助教 (50533155)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2014)
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| Budget Amount *help |
¥9,750,000 (Direct Cost: ¥7,500,000、Indirect Cost: ¥2,250,000)
Fiscal Year 2014: ¥4,940,000 (Direct Cost: ¥3,800,000、Indirect Cost: ¥1,140,000)
Fiscal Year 2013: ¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000)
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| Keywords | 染色体分配 / タンパク質複合体 / X線結晶構造解析 / 生化学 / 酵素反応 / 生物物理 / 走査プローブ顕微鏡 / 分子認識 / 蛋白質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は真核生物の染色体分配装置の立体構造と機能をタンパク質レベルから細胞レベルに至る多面的な解析を行い、その分子機構を明らかにすることにある。
今年度はCENP-L-CENP-N複合体とCENP-CのNMR解析に向けたサンプル調整を行った。N15とC13ラベルしたサンプルを調整したところ、サンプルの不安定性およびオリゴマー形成のためNMRに必要なタンパク質濃度まで濃縮することができずNMR測定できなかった。一方、より小さなコンストラクトでは４度で2週間ほど安定であった。現在はこの試料を用いて立体構造解析、相互作用領域特定のためNMR解析を行っている。
一方、細胞を用いた解析ではCENP-Cをノックアウトしたニワトリ細胞にドメインを欠失したCENP-Cを導入し、その際に他の染色体分配因子がどのように局在し、そのレベルが変化するかを観察した。その結果、CENP-CのN末端1/3を欠失したコンストラクトではCENP-Hのキネトコア局在レベルが低下した。一方、C末端1/3のCENP-Cコンストラクトではそのような低下は見られなかった。別の染色体分配因子Mis12の場合はN末端1/3欠失したコンストラクトおよびC末端1/3コンストラクトいずれにおいてもキネトコア局在レベルは観測できなかった。このような違いはCENP-HとMis12がCENP-Cに結合する領域及びその制御が異なっていることを意味する。現在はこのような相互作用に関わる領域の立体構造解析を行っている。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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Report
(2 results)
Research Products
(13 results)
