止血血栓形成に関わる複合体プロテアーゼの構造生物学的研究

• Project Area: Structural basis of cell-signalling complexes mediating signal perception, transduction and responses
• Project/Area Number: 25121745
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: National Cardiovascular Center Research Institute
• Principal Investigator: 武田 壮一 独立行政法人国立循環器病研究センター, 研究所, 室長 (80332279)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2014)
• Budget Amount: ¥5,460,000 (Direct Cost: ¥4,200,000、Indirect Cost: ¥1,260,000); Fiscal Year 2014: ¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000); Fiscal Year 2013: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,000,000、Indirect Cost: ¥600,000)
• Keywords: プロテアーゼ / 血栓 / 構造生物学 / X線結晶構造解析 / 蛋白質複合体 / 血液凝固 / シグナル伝達 / トロンビン

Outline of Annual Research Achievements

止血血栓形成機構の破たんは心筋梗塞や脳梗塞につながる重篤な血栓症などを引き起こすため、その制御機構の理解は医学的に非常に重要な課題である。本研究では血栓形成・止血機構に関与するプロテアーゼとその阻害および調節機構を担うタンパク質群に焦点を当て、構造生物学的視点からプロテオリシスが関与するシグナル伝達機構を明らかにすることを目指す。
血液凝固第X因子（FX)やIX因子（FIX)は切断・活性化に伴い、補因子（第V因子および第VIII因子）との結合し複合体プロテアーゼを形成する。切断による活性化は酵素中心の活性化のみならず、複合体形成のインターフェースの形成を引き起こすと考えられているが、不活性型の立体構造が不明であるため、複合体形成のメカニズムは不明である。不活性型FXおよびFIXの構造解明のために、Glaドメインを欠失し、活性残基に変異（S195S)を入れた、FXおよびFXIをバキュロウィルス＋Sf9細胞で発現し、精製、結晶化を行った。FXについては微結晶を得ることに成功し、現在結晶の改良を進めている。FIXについては糖鎖構造がヘテロになって発現することが判明したため、糖鎖修飾残基に変異を入れた試料の調製を行い、結晶化を進めている。

Research Progress Status

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

26年度が最終年度であるため、記入しない。