グレリン細胞性状・機能 の解析

• Project Area: Molecular Basis and Disorders of Control of Apetite and Fat Accumulation
• Project/Area Number: 25126713
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 岩倉 浩 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20378615)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2014)
• Budget Amount: ¥6,760,000 (Direct Cost: ¥5,200,000、Indirect Cost: ¥1,560,000); Fiscal Year 2014: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000); Fiscal Year 2013: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000)
• Keywords: グレリン / 細胞株 / 遺伝子プロファイル / 分泌調節 / 生合成

Outline of Annual Research Achievements

すでに取得済みであるMGN3-1細胞（グレリン分泌細胞株）、MIN6細胞（膵β細胞株）、αTC細胞（膵α細胞株）でのマイクロアレイデータについて、脂肪酸輸送代謝関連遺伝子の解析を中心に行った。これまでに、我々は、膵β細胞では、グレリンおよびグレリン-O-acyltransferaseを導入しても、オクタン酸の添加なしにはアシル化グレリンの産生がほとんど起きないこと、グレリン細胞と膵β細胞との脂質代謝に差異がある可能性を見いだしてきた。MGN3-1細胞とMIN6細胞間での脂質代謝について、脂肪酸取込み、代謝等について検討を行ったところ、脂肪酸取込み、細胞内脂質の一部に差異があることを見いだした。両細胞の遺伝子発現プロファイルを比較検討したところ、脂質取込みに関連する遺伝子、またβ酸化に関連する遺伝子の一部の発現に差異があることを見いだした。このうち、MGN3-1細胞で発現が高かった脂質取込み関連遺伝子の一つを、siRNAにてノックダウンしたところ、MGN3-1細胞への脂質取込みは減弱した。
受容体発現に関しては、発現量が低いことから、マイクロアレイによる解析は困難であったため、RNAseqを新たに行った。発現の高かった受容体に関して、グレリン生合成、分泌への影響について検討中である。
一方、グレリンプロモーター支配下に蛍光蛋白を発現するトランスジェニックマウスに関しては、グレリン細胞における蛍光発現を確認し、セルソーターによる細胞単離にも成功しつつある。ただし、現状、グレリンmRNA発現を蛍光陽性細胞と、陰性細胞の間で比較した際に、数倍程度の差しか認められておらず、RNA回収量も限られており、今後、さらに系の安定化を図る必要がある。

Research Progress Status

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] The regulation of circulating ghrelin — with recent updates from cell-based assays [Review] (2015)
  • Author(s): Iwakura H, Kangawa K, Nakao K.
  • Journal Title: Endocrine Journal Volume: 62 Issue: 2 Pages: 107-122
  • DOI: 10.1507/endocrj.EJ14-0419
  • NAID: 130004694065
  • ISSN: 0918-8959, 1348-4540
• [Journal Article] Nutrients Differentially Regulate Nucleobindin-2/Nesfatin-1 In Vitro in Cultured Stomach Ghrelinoma (MGN3-1) Cells and In Vivo in Male Mice. (2014)
  • Author(s): Mohan H, Ramesh N, Mortazavi S, Le A, Iwakura H, Unniappan S.
  • Journal Title: PLoS One Volume: 9 Issue: 12 Pages: e115102-e115102
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0115102
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Reduction in circulating ghrelin concentration after maturation does not affect food intake (2014)
  • Author(s): Ariyasu H, Yamada G, Iwakura H, Matsumura S, Inoue K, Kangawa K, Nakao K, Akamizu T
  • Journal Title: Endocrine Journal Volume: 61 Issue: 10 Pages: 1041-1052
  • DOI: 10.1507/endocrj.EJ14-0255
  • NAID: 130004704359
  • ISSN: 0918-8959, 1348-4540
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Clinical effects of ghrelin on gastrointestinal involvement in patients with systemic sclerosis (2014)
  • Author(s): Ariyasu H, Iwakura H, Yukawa N, Murayama T, Yokode M, Tada H, Yoshimura K, Teramukai S, Ito T, Shimizu A, Yonezawa A, Kangawa K, Mimori T, Akamizu T
  • Journal Title: Endocrine Journal Volume: 61 Issue: 7 Pages: 735-742
  • DOI: 10.1507/endocrj.EJ14-0088
  • NAID: 130004443975
  • ISSN: 0918-8959, 1348-4540
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] 摂食調節因子産生細胞株 (2014)
  • Author(s): 岩倉浩、中尾一和
  • Journal Title: 日本臨床 Volume: 72 Pages: 94-98
• [Journal Article] A link between FTO, ghrelin, and impaired brain food-cue responsivity (2013)
  • Author(s): Karra E, O'Daly OG, Choudhury AI, Yousseif A, Millership S, Neary MT, Scott WR, Chandarana K, Manning S, Hess ME, Iwakura H, Akamizu T, Millet Q, Gelegen C, Drew ME, Rahman S, Emmanuel JJ, Williams SC, Rüther UU, Brüning JC, Withers DJ, Zelaya FO, Batterham RL
  • Journal Title: J Clin Invest Volume: 123(8) Issue: 8 Pages: 3539-3551
  • DOI: 10.1172/jci44403
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Overexpression of intraislet ghrelin enhances β-cell proliferation after streptozotocin-induced β-cell injury in mice (2013)
  • Author(s): Bando M, Iwakura H, Ariyasu H, Koyama H, Hosoda K, Adachi S, Nakao K, Kangawa K, Akamizu T
  • Journal Title: Am J Physiol Endocrinol Metab Volume: 305 Issue: 1 Pages: E140-E148
  • DOI: 10.1152/ajpendo.00112.2013
  • Peer Reviewed
• [Presentation] グレリン細胞における脂肪酸輸送・代謝の検討 (2014)
  • Author(s): 坂東 美佳、岩倉 浩, 小山 博之, 赤水 尚史, 寒川 賢治, 中尾 一和
  • Organizer: 第35回日本肥満学会総会
  • Place of Presentation: シーガイアコンベンションセンター
  • Year and Date: 2014-10-24 – 2014-10-25
• [Presentation] グレリン産生細胞株樹立によるグレリン生合成、分泌機構の解明 (2013)
  • Author(s): 岩倉 浩
  • Organizer: 第86回日本内分泌学会学術総会
  • Place of Presentation: 仙台国際センター
• [Presentation] アミノ酸によるin vitroでのグレリン分泌調節機構の解明 (2013)
  • Author(s): 小山博之、岩倉 浩、細田洋司、坂東美佳、細田公則、寒川賢治、中尾一和
  • Organizer: 第86回日本内分泌学会学術総会
  • Place of Presentation: 仙台国際センター
• [Presentation] ストレプトゾトシン誘導膵β細胞障害時におけるグレリンの細胞増殖促進作用の検討 (2013)
  • Author(s): 坂東 美佳, 岩倉 浩, 有安 宏之, 小山 博之, 細田 公則, 足立 壯一, 中尾 一和, 寒川 賢治, 赤水 尚史
  • Organizer: 第34回日本肥満学会総会
  • Place of Presentation: 東京フォーラム
• [Presentation] トリプトファンによるカルシウム感知受容体を介したグレリン分泌調節への影響 (2013)
  • Author(s): 小山 博之, 岩倉 浩, 細田 洋司, 坂東 美佳, 細田 公則, 寒川 賢治, 中尾 一和
  • Organizer: 第34回日本肥満学会総会
  • Place of Presentation: 東京フォーラム