一方向からDNA鎖間架橋と衝突した複製フォークのプロセシング機構の解析
Publicly Offered Research
| Project Area | Coupling of replication, repair and transcription, and their common mechanism of chromatin remodeling |
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| Project/Area Number |
25131719
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Review Section |
Biological Sciences
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| Research Institution | Tokyo University of Pharmacy and Life Science |
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Principal Investigator |
橋本 吉民 東京薬科大学, 生命科学部, 助教 (50616761)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2014)
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| Budget Amount *help |
¥11,960,000 (Direct Cost: ¥9,200,000、Indirect Cost: ¥2,760,000)
Fiscal Year 2014: ¥5,980,000 (Direct Cost: ¥4,600,000、Indirect Cost: ¥1,380,000)
Fiscal Year 2013: ¥5,980,000 (Direct Cost: ¥4,600,000、Indirect Cost: ¥1,380,000)
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| Keywords | DNA複製フォーク / レプリソーム / CMGヘリカーゼ / アフリカツメガエル卵無細胞系 / オーキシンデグロン法 / CDK / ATR/ATM / DNA鎖間架橋 / 複製フォーク / 複製再開 / GINS |
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| Outline of Annual Research Achievements |
崩壊した複製フォークとレプリソームが再生可能であるのかどうかを明らかにするため、アフリカツメガエル卵無細胞系を用いてDNA鎖間架橋と衝突した複製フォークのプロセシング過程を解析する計画であったが、鋳型DNAの作製に手間取ったため期間内での解析はほとんど出来なかった。そこで、別の手段としてオーキシンデグロン法を用いてレプリソーム因子を直接破壊することによりフォーク崩壊を誘導する系を新たに構築して、複製再開におけるレプリソーム再形成について解析した。
GINSはCdc45、MCMと共に複製フォーク先端においてCMG複合体を形成してヘリカーゼとして働くことが知られている。内在性GINSをデグロン配列付加型GINSと置換して複製開始させ、アフィディコリンによりフォーク停止を起こした状態でオーキシン添加してGINSの分解誘導を行った。その後アフィディコリンを除くと、GINS非存在下では複製再開しないが、GINS存在下ではCDK活性非依存的に複製再開が起きることが分かった。また、このときPsf2サブユニットのATR/ATMリン酸化部位に変異をもつGINSでは複製再開活性が低下することも分かった。
これらの結果は、停止したレプリソーム内のCMGヘリカーゼからGINSが脱落した場合、複製開始反応とは異なるATR/ATM活性依存的な経路によりGINSの再結合が起こり、CMGヘリカーゼを含むレプリソームが再形成されることを示唆している。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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Report
(2 results)
Research Products
(3 results)
