Publicly Offered Research
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
前年度の研究で、ヒト胎児心臓のmRNAより6種類の蛋白をコードするクローンを分離した。このうち4種類はG蛋白に関連する報告がなく、新規G蛋白活性調節因子の候補蛋白と考えられた。本年度は候補蛋白のG蛋白活性調節因子としての機能を解析した。まず、分離されたプラスミドを再び酵母へ導入し、翻訳された蛋白がG蛋白を活性化すること、つまり酵母の増殖を促進することを検討したところ、すべてのクローンで増殖活性を確認できた。さらにスクリーンされたクローンがGαi3、GαS、Gα16のαサブユニット選択性を有するのか、それぞれのαサブユニットを発現する酵母へ導入し検討した。その結果、候補蛋白のうちGαSのみを選択的に活性化するものが1種,すべてのGαサブユニットを活性化するものが3種であった。これまでの研究から、すべてのGαサブユニットを活性化するものはGβγと相互作用することが多いことがわかっている。次に、スクリーンされた蛋白がG蛋白サブユニットと直接複合体を形成し得ることをin vitroで検討するため、候補蛋白をGST融合蛋白として大腸菌で合成した。4種の候補蛋白のうち、2種については想定通りの分子量でGST融合蛋白を得ることができた。しかし、他の2種については可溶性蛋白として分離することができていない。今後はGST融合蛋白が得られた候補蛋白について、精製G蛋白を用いたin vitroの実験で相互作用を検討する予定である。G蛋白活性調節因子を組み入れたシミュレーションモデル構築については、哺乳類の既存データのみではパラメーターを設定するのに不十分であり、哺乳類以外の生化学的情報も収集し、信頼あるモデルとなり得るか検討を重ねている。
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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Volume: 印刷中
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