腸管寄生性原虫赤痢アメーバにおけるオートファジーの解析
Publicly Offered Research
| Project Area | Multidisciplinary research on autophagy: from molecular mechanisms to disease states |
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| Project/Area Number |
26111524
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Review Section |
Biological Sciences
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
津久井 久美子 国立感染症研究所, 寄生動物部, 主任研究官 (00420092)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2015)
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| Budget Amount *help |
¥10,010,000 (Direct Cost: ¥7,700,000、Indirect Cost: ¥2,310,000)
Fiscal Year 2015: ¥5,070,000 (Direct Cost: ¥3,900,000、Indirect Cost: ¥1,170,000)
Fiscal Year 2014: ¥4,940,000 (Direct Cost: ¥3,800,000、Indirect Cost: ¥1,140,000)
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| Keywords | Atg8 / autophagy / Entamoeba histolytica / phagocytosis / phagosome maturation / protist / lysosome |
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| Outline of Annual Research Achievements |
オートファジーは真核生物に広く保存している。典型的なモデル生物では細胞質成分をリソソームに輸送し分解・消化するシステムと捉えられているが、初期に分化した赤痢アメーバ原虫においては貪食胞の成熟過程に重要であることが知られていた。そこでオートファジーのマーカー分子であるAtg8の機能、Atg8脂質修飾に関与する分子の解明を目指し、以下の研究を行った。１）Atg8, Atg5, Atg12 の貪食胞への動員を各GFP融合タンパク質を用いてライブイメージングにより検討した。２）Atg8結合タンパク質として同定した解糖系酵素のmycタグ融合タンパク質発現株を作成し、Atg8との結合、局在の検討を行った。３）Atg8遺伝子発現抑制株とコントロール株から貪食胞を回収し、貪食胞のプロテオーム解析からAtg8により制御される分子群の同定を行った。
１）動物細胞貪食時の局在を検討した。Atg5, Atg12は貪食胞への局在が観察されず、一方Atg8は貪食開始直後から貪食胞の深部に局在が始まることが示された。また、このときAtg8陽性の小胞が近傍に存在する像が得られたことから、Atg8はAtg5, Atg12により局所で脂質修飾されるのではなく、脂質修飾されたAtg8が小胞から供給される可能性が高いと考えられた。２）mycタグ融合解糖系酵素は抗Atg8抗体により共沈することが示された。しかし細胞内局在は定常状態で細胞質であり、今後細胞内でAtg8と共局在する場の解明が必要である。３）貪食胞の回収方法を決定し、Atg8遺伝子発現抑制株で動員の減少するタンパク質を、103個同定した。この中にはv-ATPaseサブユニットのうち4遺伝子が含まれており、Atg8遺伝子発現抑制株での貪食胞酸性化の低下を反映していた。今後Atg8がこれらの分子の局在をどのように制御するのか解析が必要である。
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| Research Progress Status |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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Report
(2 results)
Research Products
(19 results)
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[Journal Article] Atg8 is involved in endosomal and phagosomal acidification in the parasitic protist Entamoeba histolytica.2015
Author(s)
Picazarri, K., Nakada-Tsukui, K., Tsuboi, K., Miyamoto, E., Watanabe, N., Kawakami, E., and Nozaki, T.
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Journal Title
Cell Microbiol
Volume: 17
Issue: 10
Pages: 1510-1522
DOI
Related Report
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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