2009 Fiscal Year Annual Research Report
低エネルギーフォトンによる生体分子の修飾・代謝の計測
| Project Area | Molecular Science for Supra Functional Systems ? Development of Advanced Methods for Exploring Elementary Process |
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| Project/Area Number |
19056003
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
粟津 邦男 Osaka University, 大学院・工学研究科, 教授 (30324817)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
間 久直 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教 (70437375)
石井 克典 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教 (20512073)
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| Keywords | 質量分析 / タンパク質 / MALDI / イオン化メカニズム / 中赤外レーザー / 難溶性タンパク質 |
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| Research Abstract |
マトリックス支援レーザー脱離イオン化(MALDI)法はタンパク質など生体高分子の質量分析におけるイオン化法として広く用いられているが、MALDIのイオン化機序は未だ解明には至っていない。MALDIのイオン化機序を解明することによってイオン化効率や再現性が向上すれば、MALDIのさらなる応用が期待できる。そこで、まず、試料作成に用いられる溶媒に注目し、試料溶媒によるイオン化効率の変化について検討した。用いた溶媒は、水、重水、アセトニトリル、メタノール、エタノール、t-ブタノール、テトラヒドロフラン(THF)の7種である。ペプチドにはbradykinin fragment 1-7を、マトリックスには2,5-dihydroxybenzoic acidを用いた。窒素レーザーを用いたMALDIにより試料をイオン化させ、飛行時間型質量分析計で分析した結果、マトリックスイオンとペプチドイオンの量の間に相関が見られなかった。この結果から、マトリックスのイオン化はペプチドのイオン化に直接関与しておらず、溶媒と試料との水素結合がペプチドのイオン化に大きく寄与している可能性が示唆された。
また、通常の紫外レーザーによるMALDIではイオン化が困難な難溶性タンパク質のイオン化に中赤外レーザーと紫外レーザーの同時照射が有効であるとの報告がある。予備実験としてまず、分析試料にbradykinin fragment 1-7、angiotensin II、P14R、およびinsulinの混合物、マトリックスにα-cyano-4-hydroxycinnamic acidを用いて実験を行った。紫外レーザーのみ、中赤外レーザーのみではイオンが検出されない条件で紫外レーザーと中赤外レーザーを同時に照射した結果、4種の試料全てのイオンを検出することができた。
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[Presentation] Measurement of organic metabolism using low-energy photons2009
Author(s)
Kunio Awazu, Satoshi Furukawa, Katsunori Ishii, Hisanao Hazama
Organizer
3rd International Symposium on Molecular Science for Supra Functional Systems-Development of Advanced Methods for Exploring Elementary Processes
Place of Presentation
Digital Multi-purpose Hall, Tokyo Institute of Technology
Year and Date
2009-06-04
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