2020 Fiscal Year Annual Research Report
Reconstitution of totipotent nuclei in a test tube
| Project Area | Program of totipotency: From decoding to designing |
|---|
| Project/Area Number |
19H05755
|
|---|
| Research Institution | Institute of Physical and Chemical Research |
|---|
Principal Investigator |
新冨 圭史 国立研究開発法人理化学研究所, 開拓研究本部, 専任研究員 (60462694)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-06-28 – 2024-03-31
|
| Keywords | 染色体 / 再構成 / 再プログラム化 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
マウスで核移植クローン作成する際には、ドナー核を分裂期のレシピエント胚に顕微注入する必要がある。この経験則に着目し、細胞周期を自由に制御できるカエル卵抽出液を使って、ドナー核で起こる現象の再現を試みた。ドナー核のモデルとしてカエル赤血球核を単離し、分裂期に停止した卵抽出液に加えたところ、核膜崩壊と染色体構築が観察された、その後、細胞周期を間期に進めると、核が再形成されDNA複製も検出された。一方で、赤血球核をいきなり間期核に加えても複製が検出されなかった。上記の結果は、分裂期に起こるドナー核の構造変化が再プログラム化に重要であることを強く示唆する。分裂期卵抽出液では赤血球核-染色体変換が観察されるので、その前後でクロマチン結合タンパク質がどのように変化するか検討した。その結果、分裂期において、コンデンシンIとII、トポイソメラーゼII（トポII）、H1.8（初期胚特異的なリンカーヒストンバリアント）が新たに結合することが判明した。そのうち、コンデンシンIとトポIIは赤血球核-染色体変換に必須であり（、DNA複製能の回復に中心的な役割を担うことが強く示唆された。そこで、分裂期におけるトポIIの機能解析を進めた。意外にも、トポIIは、異なる染色体間のDNAの絡まりをほどくだけでなく、同一染色体内でDNAの絡まりを作ることによっても染色体構築に貢献していることが証明された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
計画開始当初、実験系を確立し、その後、核の再プログラム化に中心的な役割を果たす因子の候補を絞り込むことが、計画全体の律速段階であると考えていた。そのため、これまでのステップを効率的に進展させることが求められた。コロナ禍のために活動時間が制限された中でも、周到な準備をもとに作業を進めた結果、大きな滞りなく目標を達成することができた。卵抽出液、特異抗体、組換えタンパク質などの、高品質の実験材料を準備することができた点でも、次年度以降の計画に弾みをつけることができた。
|
| Strategy for Future Research Activity |
再プログラム化された核が、DNA複製能を回復するために必要な因子の同定を目指す。これまでの研究によって、コンデンシンIとトポIIが再プログラム化に中心的な役割を担う可能性が示唆された。まず、コンデンシンIやトポIIを除去した分裂期抽出液で赤血球核をインキュベーションしたのち、間期に進めたときにDNA複製能が回復するかどうかを調べる。回復しない場合には、これらを除去した抽出液で作った間期核を単離し、質量分析によってクロマチン結合タンパク質を同定する。対照実験として複製能の回復した核についても同様の解析を行い、それらの結果を比較することにより、複製開始にいたるどのステップに障害があるのかを検討する。また、赤血球核が分裂期卵抽出液と相互作用することによって、コヒーシンやH1.0（体細胞特異的なリンカーヒストンバリアント）がクロマチンから解離することも明らかになった（図３）。これまでに、研究代表者自身の研究によって、コヒーシンの解離はWaplが不可欠であることが示されており、H1.0の解離にはNap1の関与する可能性が示唆される。これらの調製因子を除いた時に赤血球核-染色体変換やDNA複製が起こるのかを解析し、これらの解離が再プログラム化に果たす役割を明らかにする。
|
Research Products
(3 results)
