2022 Fiscal Year Annual Research Report
pHストレス適応を司るpH誘導型転写因子の実体解明
| Project Area | Establishment of pH Biology |
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| Project/Area Number |
20H05788
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
高橋 重成 京都大学, 工学研究科, 准教授 (70604635)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
圓岡 真宏 京都大学, 高等研究院, 特定助教 (70736412)
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| Project Period (FY) |
2020-10-02 – 2023-03-31
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| Keywords | pHストレス適応 / がん / 転写因子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究ではpHに対する生物学的理解に変革を起こすべく、pH誘導型転写因子の同定という生命科学の最重要課題の一つに挑むことを主たる目的とした。当該研究課題においては、まず腫瘍で特に発現増加が認められるプロトン排出系タンパク質8種類が、低pH刺激により発現増加することをおよそ15種類の肺がん細胞株を使った実験により明らかにした。即ち、細胞には低pH刺激応答してプロトン排出系タンパク質の発現誘導が行われるシステム（pH誘導型転写因子）が存在していることが強く示唆された。続いて、低pH刺激による遺伝子発現誘導に必要なエンハンサー領域を同定するべく、CRISPR-Cas9技術を駆使して上流・下流それぞれ約2000bpにおいて各200bpずつ欠損した遺伝子欠損細胞株を多数樹立し、最終的に領域の同定に至った。そして、本転写因子結合領域に結合するタンパク質を質量分析を用いて同定し、さらに圓岡（研究分担者）においては、低pH刺激により発現増加が認められた遺伝子の上流にGFPを組み込んだノックイン細胞株の樹立しCRISPR Screeningを行うことで、最終的に質量分析を用いた実験結果と併せておよそ400種類のpH誘導型転写因子の候補遺伝子群を同定した。現在、この候補遺伝子群について、一つずつCRISPR-Cas9技術を用いて遺伝子欠損株を作成しており、およそ50種類の遺伝子についてはpH刺激に対する応答の解析が完了している状況である。今後は全ての候補遺伝子群について解析を完了させることで、pH誘導型転写因子を最終決定させる予定である。
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| Research Progress Status |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] N-Methylamide-structured SB366791 derivatives with high TRPV1 antagonistic activity: toward PET radiotracers to visualize TRPV12022
Author(s)
Kida T, Takahashi N (Co-first author), Mori MX, Sun JH, Oota H, Nishino K, Okauchi T, Ochi Y, Kano D, Tateishi U, Watanabe Y, Cui Y, Mori Y, Doi H.
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Journal Title
RSC Medicinal Chemistry
Volume: 13
Pages: 1197～1204
DOI
Peer Reviewed
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