2021 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of Molecular Dynamics for Structural Spine Plasticity during the Critical Period
Project Area | Inducing lifelong plasticity (iPlasticity) by brain rejuvenation: elucidation and manipulation of critical period mechanisms |
Project/Area Number |
20H05918
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Research Institution | Niigata University |
Principal Investigator |
内ヶ島 基政 新潟大学, 脳研究所, 准教授 (10614662)
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Project Period (FY) |
2020-11-19 – 2025-03-31
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Keywords | スパイン / 分子標識 / イメージング / 臨界期 / 眼優位可塑性 / ゲノム編集 |
Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、臨界期のモデルとして研究されてきたマウス一次視覚野の眼優位可塑性に着目し、独自に開発した生体内ゲノム編集に基づいた単一ニューロン高感度分子局在解析技術を用いて、眼優位可塑性を誘導した際に見られる様々なスパイン分子の分布パターンおよび動態を生体から固定組織に至るまでシームレスに観察する。当初予定されたシナプス長期可塑性に関与するとされる10種類の分子のうち、これまでにAMPA受容体のサブユニットを含む6種類の分子について、子宮内電気穿孔法あるいはアデノ随伴ウイルスベクターを介した化学タグ標識に成功した。さらに、化学タグが細胞内外の分子を識別できる利点を生かすことによって、シナプスに発現するAMPA受容体のうち、細胞表面でイオンチャネルとして機能する細胞表面プールと細胞内にてシナプス可塑性に備える細胞内プールを1スパイン毎に標識仕分けることにも成功した。シグナルの定量解析により、個々のスパインにおける細胞内外のAMPA受容体発現シグナルは、スパインの構造可塑性の指標とされるスパイン体積に対して正の相関を示した。これは機能的なAMPA受容体の分布を1スパインレベルで調べた過去の報告に一致する。したがって、本研究で開発された新規の分子標識技術は内在シナプス分子を正しく標識していることを示している。一方、一部の標識分子はスパイン体積との相関を示さなかった。現在は、この分子がスパインの構造可塑性とどのような関係にあるかを調べるため、分子標識が行われたニューロンに対してグルタミン酸アンケイジングによるスパイン構造可塑性誘導実験を予定している。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画通り、複数のシナプス長期可塑性関連分子の定量的な標識に成功し、1スパインにおける分子標識シグナルの強度とスパイン体積との相関を調べることができたため、本研究は概ね順調に進展していると判断した。
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Strategy for Future Research Activity |
2021年度に得たスパイン体積と正の相関を示さない分子のスパイン構造可塑性における役割を明らかにする目的で、分子標識が行われた大脳皮質ニューロンに対してグルタミン酸アンケイジングによるスパイン構造可塑性誘導実験を予定している。さらに、一次視覚野におけるin vivoライブセルイメージング を行う。もし2光子in vivoイメージングを行う上で内在分子のシグナルが十分な輝度を得られない場合は、スプリットGFPをタンデムに連結するなどの方策を試す。これらに加え、今年度も引き続きシナプス長期可塑性にて重要な役割が知られる分子標識を目指してゲノム編集ライブラリーのさらなる拡充を図る。
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