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2009 Fiscal Year Annual Research Report

Xist RNA作用マシナリーの調節機構

Planned Research

Project AreaFunctional machinery for non-coding RNAs
Project/Area Number 21115005
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

佐渡 敬  Kyushu University, 生体防御医学研究所, 准教授 (70321601)

Keywords高分子非コードRNA / 発生・分化 / ヘテロクロマチン / X染色体 / 遺伝学
Research Abstract

EGFPおよびRFPとSmchd1との融合蛋白質を発現するトランスジェニックマウスを作製するにあたって,いくつかのこのとなるプロモーターの制御化に融合蛋白質遺伝子をつないだコンストラクトを構築し,最初に培養細胞で発現の様子を観察した.その結果に基づき,最も適切と思われるコンストラクトを用いて,トランスジェニックマウスをそれぞれ複数ライン作製し,その発現を胚線維芽細胞と初期胚で観察した.その結果,いずれのラインにおいても融合蛋白質の蛍光強度は期待したほど高いものではなく,着床前胚におけるX染色体の活性変化をこれらの融合蛋白質の動態で可視化することは困難と思われた.しかし,Smchd1-EGFPの発現を抗GFP抗体で観察したところ,Xist RNAとの共局在が確認されたことから,Smchd1-EGFPは期待したよりは発現量が低いものの,内在性Smchd1同様不活性X染色体に局在することが分かった.この結果は,抗GFP抗体でSmchd1-EGFPと相互作用する蛋白質を免疫沈降するのには,むしろ好都合と考え,トランスジェニックマウスの胎児細胞抽出液を用いた解析の準備を進めている.これまでに行った予備実験において,抗GFP抗体で胎児細胞抽出液からSmchd1-EGFPを免疫沈降出来ることを確認した.しかしながら,共沈降する蛋白質を確認するには至っておらず,沈降物の洗浄等に関してはまだまだ詳細な条件検討が必要である.とはいえ,Smchd1と相互作用する蛋白質を免疫沈降によって同定するための準備は整った.

  • Research Products

    (10 results)

All 2010 2009

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (9 results)

  • [Journal Article] Sex-reversed somatic cell cloning in the mouse.2009

    • Author(s)
      Inoue, K., et al.
    • Journal Title

      J.Reprod.Dev. 55

      Pages: 566-569

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] A partial loss of function mutation in the mechanism of X chromosome inactivation2010

    • Author(s)
      Hoki, Y., et al.
    • Organizer
      Keystone Symposium (A8)
    • Place of Presentation
      Taos, NM (USA)
    • Year and Date
      20100117-20100122
  • [Presentation] Prolonged expression of Xist retards X chromosome reactivation in mouse germ line.2010

    • Author(s)
      Amakawa, Y., er al.
    • Organizer
      Keystone Symposium (A8)
    • Place of Presentation
      Taos, NM (USA)
    • Year and Date
      20100117-20100122
  • [Presentation] A partial loss of function mutation in the mechanism of X chromosome2009

    • Author(s)
      保川裕子, 他3名
    • Organizer
      第32回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      20091209-20091212
  • [Presentation] Prolonged expression of Xist retards X chromosome reactivation in mouse germ line.2009

    • Author(s)
      尼川裕子, 他3名
    • Organizer
      第32回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      20091209-20091212
  • [Presentation] 哺乳類のメス生殖細胞における不活性X染色体の再活性化2009

    • Author(s)
      佐渡敬
    • Organizer
      第82回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      20091021-20091023
  • [Presentation] マウスのメス生殖細胞におけるXist発現消失時期の遅延はX染色体再活性化を遅らせる2009

    • Author(s)
      尼川裕子, 他3名
    • Organizer
      日本遺伝学会第81回大会
    • Place of Presentation
      松本
    • Year and Date
      20090916-20090918
  • [Presentation] X染色体の不活性化の分子機構の部分的機能欠損変異2009

    • Author(s)
      保木裕子, 他3名
    • Organizer
      日本遺伝学会第81回大会
    • Place of Presentation
      松本
    • Year and Date
      20090916-20090918
  • [Presentation] Toward the understanding of molecular events underlying X-inactivation2009

    • Author(s)
      Sado, T.
    • Organizer
      The 24th Naito Conference on Nuclear Dynamics and RNA[II]
    • Place of Presentation
      札幌
    • Year and Date
      20090623-20090626
  • [Presentation] X染色体の不活性化の分子機構2009

    • Author(s)
      佐渡 敬
    • Organizer
      第138回染色体研究会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2009-06-13

URL: 

Published: 2011-06-16   Modified: 2016-04-21  

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