2013 Fiscal Year Annual Research Report
Project Area | Environmental sensing of plants: Signal perception, processing and cellular responses |
Project/Area Number |
22120008
|
Research Institution | 株式会社日立製作所(研究開発本部) |
Principal Investigator |
神原 秀記 株式会社日立製作所(研究開発グループ), その他部局等, その他 (20397011)
|
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
梶山 智晴 株式会社日立製作所(研究開発グループ), その他部局等, その他 (50573044)
|
Project Period (FY) |
2010-06-23 – 2015-03-31
|
Keywords | 単一細胞解析 / 遺伝子発現 / 遺伝子定量解析 / 植物組織 / 定量PCR / cDNAライブラリ / 組織採取 |
Research Abstract |
植物組織を対象とした、1細胞レベルの複数遺伝子定量発現解析技術を開発している。植物組織の遺伝子発現解析では、以下の課題が存在する。(1)植物組織は細胞が細胞壁に囲まれており、細胞質の抽出のためには細胞壁を破壊する必要がある。(2)植物細胞は、細胞内に核酸分解酵素を多く含んだ液胞が存在し、小さな刺激でも細胞内で浸潤することがあり、細胞質内の遺伝子分解が起こりやすい。 本年度は、以下の技術開発を行った。(1)「微小切片の高速採取」の試作機が完成。ビデオマイクロスコープ観察下で、約100μmの微小組織を、高速(15秒以内)に採取できることを確認した。(2)上記システムを利用し、4日齢のシロイヌナズナの若芽を対象に、茎頂分裂細胞部、茎頂近傍の胚軸部、葉脈を回避した子葉組織の組織採取を行い、網羅的遺伝子発現解析を実施した。この手法により、組織特異的な遺伝子を複数選定できた。発現遺伝子の再現性は10RPKM以上のハウスキーピング遺伝子において、約30%の揺らぎで解析できており、高い再現性を有していることを確認した。(3)開発した網羅的遺伝子発現解析技術に関し、本領域内の共同研究者向けにワークショップを開催して、応用研究を推進した。
|
Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2013年度までに、繰り返し定量PCR解析のための洗浄技術、植物組織採取技術、および組織からのcDNAライブラリ合成技術を開発した。さらに、次世代シーケンサを用いる網羅的解析技術も完成した。また、微小切片の高速採取装置の試作も完了し、組織の網羅的遺伝子発現解析を行う活用研究も実施できた。
|
Strategy for Future Research Activity |
微小切片の高速採取装置を活用する応用研究を進める。また、広く応用するための使い勝手の向上技術や、修正すべき箇所の改良を行う。また、次世代シーケンサ利用網羅的解析プロトコルを用い、微小切片の遺伝子発現解析を他の研究班と連携して推進する。
|