2012 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of disorders defective in the mechanisms for fork stabilization
| Project Area | Functions of non-coding DNA region for genome integrity |
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| Project/Area Number |
23114010
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
高田 穣 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (30281728)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 非コードDNA / チェックポイント / ファンコニ貧血経路 / 染色体脆弱部位 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１）染色体ストレス高感受性部位の網羅的解析：染色体ストレス下におけるDNA損傷応答タンパク質のクロマチン集積を指標に、ストレス高感受性部位を同定し、その性状を解析する。昨年度、ATRIP、FANCD2等のDNA損傷応答タンパク質に対する抗体の作成を行ったが、質の良い抗体の作成はできなかった。しかし、新規のゲノム編集酵素であるTALENを用いてヒト細胞のFANCD2遺伝子C末領域に３ｘFLAGタグをノックインすることに成功した。現在この細胞を用いてChIP条件の検討中である。今後ChIP-seq法によって、非コードDNA領域との関連に着目しつ
つ、ストレス高感受性部位をゲノムワイドに同定することを試みる。
２）複合体プロテオミクスによる複製フォーク安定化と崩壊機構の解析：現在までに、ATRIP,FANCL,FANCD2、FANCIの複合体精製を行い、あらたに会合する因子の同定を行った。今後、同定された新規因子を含めて、候補因子の機能をsiRNAによって検討する。
３）染色体ストレス下のチェックポイントキナーゼATRIP-ATR初期活性化機構の解析：ATRIP因子のクロマチン集積にファンコニ貧血コア複合体成分が重要な役割を果たすことを見出した。その機能的意義とメカニズムについて、さらに検討を進める。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
抗体の作成には失敗したが、新規のゲノム編集酵素であるTALENを用いてヒト細胞のFANCD2遺伝子C末領域に３ｘFLAGタグをノックインすることに成功した。また、いくつかの重要因子について、複合体精製を行い、会合因子の同定を行った。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、領域内の他のグループとの連携を進める。たとえば、ChIP-seqは太田班との連携研究である。小林班の同定した酵母においてrDNA安定性に重要な因子の高等生物における機能のについて検討を開始する。また、桝本班とは、CENP-AシャペロンHjurpのDNA損傷と複製ストレスにおける役割について、共同研究を開始した。
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Research Products
(12 results)
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[Journal Article] Matched sibling donor stem cell transplantation for Fanconi anemia patients with T-cell somatic mosaicism.2012
Author(s)
Yabe M, Shimizu T, Morimoto T, Koike T, Takakura H, Tsukamoto H, Muroi K, Oshima K, Asami K, Takata M, Yamashita T, Kato S, Yabe H.
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Journal Title
Pediatr Transplant.
Volume: 4
Pages: 340-5.
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Histone chaperone activity of Fanconi anemia proteins, FANCD2 and FANCI, is required for DNA crosslink repair.2012
Author(s)
Sato K, Ishiai M, Toda K, Furukoshi S, Osakabe A, Tachiwana H, Takizawa Y, Kagawa W, Kitao H, Dohmae N, Obuse C, Kimura H, Takata M, Kurumizaka H.
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Journal Title
EMBO J.
Volume: 31
Pages: 3524-36.
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] A ubiquitin-binding protein, FAAP20, links RNF8-mediated ubiquitination to the Fanconi anemia DNA repair network.2012
Author(s)
Yan Z, Guo R, Paramasivam M, Shen W, Ling C, Fox D 3rd, Wang Y, Oostra AB, Kuehl J, Lee DY, Takata M, Hoatlin ME, Schindler D, Joenje H, de Winter JP, Li L, Seidman MM, Wang W
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Journal Title
Mol Cell.
Volume: 47
Pages: 61-75
DOI
Peer Reviewed
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