複製フォークの安定化機構とその破綻による病態の解析

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project Area: Functions of non-coding DNA region for genome integrity
• Project/Area Number: 23114010
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 高田 穣 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (30281728)
• Project Period (FY): 2011-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 複製ストレス / ゲノム安定性 / ファンコニ貧血経路 / チェックポイント / 相同組換え

Outline of Annual Research Achievements

複製ストレス下のファンコニ貧血遺伝子FANCD2のゲノムワイドな分布をChIP-seq法にて検索した。U2OS細胞のFANCD2遺伝子座の終止コドンに３XFLAGタグをTALEN法によってノックインし、抗FLAG抗体によってクロスリンクしたクロマチンを免疫沈降し、ゲノムDNAを次世代シーケンサーによる解析にかけた（東大太田研究室、総研大印南研究室との共同研究）。その結果、低用量アフィディコリンによる複製ストレス下におけるFANCD2の全長0.5-1.0Mbpの巨大遺伝子の中央部分イントロンに集積しており、しかも従来同定されたcommon fragile siteとの一致が目立っていた。この集積は、RNAseH1の発現によって低下するらしく、FANCD2のフォーカス形成も著しく低下することがわかった。面白いことに、マイトマイシンC刺激による集積も極度に低下していた。これらの結果は、FANCD2の集積メカニズムにおけるRループ形成の役割を強く示唆している。今後、なぜFANCD2が遺伝子中央部分に集積するのか、解明を試みる。

Research Progress Status

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Human FAN1 promotes strand incision in 5'-flapped DNA complexed with RPA. (2015)
  • Author(s): Takahashi D, Sato K, Hirayama E, Takata M, Kurumizaka H.
  • Journal Title: J Biochem Volume: 158 Pages: 263-70
  • DOI: doi: 10.1093/jb/mvv043
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Pluripotent cell models of fanconi anemia identify the early pathological defect in human hemoangiogenic progenitors. (2015)
  • Author(s): Suzuki NM, Niwa A, Yabe M, Hira A, Okada C, Amano N, Watanabe A, Watanabe K, Heike T, Takata M, Nakahata T, Saito MK.
  • Journal Title: Stem Cells Transl Med. Volume: 4 Pages: 333-8
  • DOI: 10.5966/sctm.2013-0172
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mutations in the Gene Encoding the E2 Conjugating Enzyme UBE2T Cause Fanconi Anemia. (2015)
  • Author(s): Hira A, Yoshida K, Sato K, Okuno Y, Shiraishi Y, Chiba K, Tanaka H, Miyano S, Shimamoto A, Tahara H, Ito E, Kojima S, Kurumizaka H, Ogawa S, Takata M, Yabe H, Yabe M.
  • Journal Title: Am J Hum Genet Volume: 96 Pages: 1001-7
  • DOI: 10.1016/j.ajhg.2015.04.022.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Third Report on Chicken Genes and Chromosomes 2015. (2015)
  • Author(s): David W Burt, Minoru Takata et al.
  • Journal Title: Cytogenetic and Genome Research Volume: 145 Pages: 78-179
  • DOI: 10.1159/000430927
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Conserved overlapping gene arrangement, restricted expression and biochemical activities of DNA polymerase ν; (POLN). (2015)
  • Author(s): Takata KI, Tomida J, Reh S, Swanhart LM, Takata M, Hukriede NA, Wood RD.
  • Journal Title: J Biol Chem Volume: 290 Pages: 27278-93
  • DOI: 10.1074/jbc.M115.677419
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Presentation] 相同組換えにおけるＲＰＡ２のユビキチン化を介した分解 (2015)
  • Author(s): 稲野将二郎、佐藤浩一、石合正道、勝木陽子、中田慎一郎、胡桃坂仁志、高田 穣
  • Organizer: BMB2015
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2015-12-01 – 2015-12-04
  • Invited
• [Presentation] 複製ストレスによるFANCD2集積部位のゲノムワイド解析 (2015)
  • Author(s): 石合正道、岩嵜航、高橋数冴、久郷和人、小田有沙、大木千夏、福井哲也、河合秀彦、山本卓、太田邦史、印南秀樹、高田穣
  • Organizer: BMB2015
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2015-12-01 – 2015-12-04
  • Invited
• [Presentation] UBE2T/FANCT is a novel FA gene identified in Japanese Fanconi anemia patients. (2015)
  • Author(s): Minoru Takata, Asuka Hira, Kenichi Yoshida, Koichi Sato, Akira Shimamoto, Hitoshi Kurumizaka, Seishi Ogawa, Hiromasa Yabe, and Miharu Yabe.
  • Organizer: The 16th Ataxia-Teleangiectasia Workshop.
  • Place of Presentation: Beijing, China
  • Year and Date: 2015-10-11 – 2015-10-14
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] ファンコニ貧血と遺伝性乳がん卵巣がん：相同組換え欠損を基盤とした高発がん症候群 (2015)
  • Author(s): 高田 穰
  • Organizer: 第74回日本癌学会 学術総会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場
  • Year and Date: 2015-10-08 – 2015-10-10
  • Invited
• [Presentation] DNA damage and repair in Fanconi anemia (2015)
  • Author(s): Minoru Takata
  • Organizer: 第２回IFOM－京都大学合同シンポジウム
  • Place of Presentation: 京都大学紫蘭会館稲森ホール
  • Year and Date: 2015-10-06 – 2015-10-07
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] Mutations in the gene encoding the E2 conjugating enzyme UBE2T cause Fanconi anemia. (2015)
  • Author(s): A. Hira, K. Yoshida, K.Sato, Y. Shiraishi, K. Chiba, H. Tanaka, S. Miyano, A. Shimamoto, H.Tahara, E.Ito, S.Kojima, H. Kurumizaka, S.Ogawa, M.Takata, H.Yabe, M. Yabe
  • Organizer: The 27th Annual Fanconi anemia research fund Scientific Symposium.
  • Place of Presentation: Toronto, Canada
  • Year and Date: 2015-09-17 – 2015-09-20
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Identification of UBE2T as a novel Fanconi anemia gene. (2015)
  • Author(s): Asuka Hira, Kenichi Yoshida, Koichi Sato, Akita Shimamoto, Hidetoshi Tahara, Hitoshi Kurumizaka, Seishi Ogawa, Minoru Takata, Hiromasa Yabe, Miharu Yabe.
  • Organizer: ICRR2015
  • Place of Presentation: 京都国際会館
  • Year and Date: 2015-05-25 – 2015-05-29
  • Int'l Joint Research
• [Book] DNA Replication, Recombination, and Repair (2015)
  • Author(s): Masamichi Ishiai, Junya Tomida, Akiko Itaya, James Hejna, Minoru Takata.
  • Total Pages: 35
  • Publisher: Springer
• [Remarks] 研究成果アーカイブ
  • URL: http://house.rbc.kyoto-u.ac.jp/research
• [Funded Workshop] Forefront of Chromosome Biology (2015)
  • Place of Presentation: 京都大学先端科学研究棟
  • Year and Date: 2015-08-10 – 2015-08-10
• [Funded Workshop] Non-coding DNA and Chromosomal Integrity (2015)
  • Place of Presentation: 淡路夢舞台
  • Year and Date: 2015-08-05 – 2015-08-08