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2015 Fiscal Year Annual Research Report

Reorganization of cytoskeleton in response to extracellular stimuli

Planned Research

Project AreaPlant cell wall as information-processing system
Project/Area Number 24114004
Research InstitutionNara Institute of Science and Technology

Principal Investigator

橋本 隆  奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (80180826)

Project Period (FY) 2012-06-28 – 2017-03-31
Keywords微小管 / 浸透圧ストレス / チューブリン / 植物 / リン酸化
Outline of Annual Research Achievements

1)αチューブリンのThr349のリン酸化を特異的に認識する抗体を作製した。この抗体を用いることにより、PHS1依存的なαチューブリンのリン酸化をより簡便に、かつより高感度に検出することが可能になった。
2)PHS1を活性化するシグナル伝達系を解明するために、遺伝子構成がアラビドプシスよりも単純なゼニゴケを実験材料として用いた共同研究を西浜講師・河内教授(京大・生命)と開始した。まず、ゼニゴケにおいて浸透圧ストレスによりαチューブリンがリン酸化されるか、このリン酸化がゼニゴケPHS1依存的かどうかを調べたところ、0.6Mソルビトール高浸透圧処理により5分以内にゼニゴケαチューブリンのThr349がリン酸化され、このリン酸化はゼニゴケPHS1破壊変異株では完全に消失した。
3)ゼニゴケゲノムには3つのMAPキナーゼ遺伝子が存在する。そのうちの、MpMPK2(Cタイプ)とMpMPK3(Dタイプ)の遺伝子破壊株における高浸透圧誘導性αチューブリンのリン酸化を調べたところ、どちらの変異株においてもリン酸化は野生株と変化はなかった。残りのMpMPK1(アラビドプシスA/Bタイプに相当)の遺伝子破壊株は致死であった。
4)PHS1自身のリン酸化アミノ酸残基を同定するために、通常の生育条件および高浸透圧条件で育成させたアラビドプシス植物体からPHS1-GFPを精製して、中神博士(理研)との共同研究でリン酸化部位を同定した。PHS1の多くのセリン残基がリン酸化され、そのうち高浸透圧処理にリン酸化が増大するものは8つあった。これらの単独リン酸化ミミック変異PHS1をアラビドプシス細胞に一過的に発現させたところ、顕著な表層微小管の脱重合は観察されなかった。複数の部位のリン酸化が必要である可能性を検討するために、リン酸化ミミック多重変異PHS1を作製し、それらの効果を検討中である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

特異的リン酸化抗体を作製することに成功し、ゼニゴケにおけるMPK破壊株の解析も順調に進行している。PHS1自己リン酸化されるアミノ酸残基の同定に関して、計画された実験を行ったが、期待される成果はまだ得られていない。

Strategy for Future Research Activity

ゼニゴケMPK1の遺伝子破壊については、条件的遺伝子破壊株の作製を共同研究として進める。PHS1自己リン酸化部位の同定については、in vitroでの自己リン酸化活性を調べ、活性が認められれば、in vitroの実験系を用いて自己リン酸化部位を解析し、同定する。

  • Research Products

    (9 results)

All 2016 2015 Other

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (6 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 2 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Abscisic acid induces ectopic outgrowth in epidermal cells through cortical microtubule reorganization in Arabidopsis thaliana.2015

    • Author(s)
      S. Takatani, T. Hirayama, T. Hashimoto, T. Takahashi, and H. Motose
    • Journal Title

      Sci. Rep.

      Volume: 5 Pages: 11364

    • DOI

      10.1038/strep11364

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Microtubules in Plants2015

    • Author(s)
      T. Hashimoto
    • Journal Title

      The Arabidopsis Book

      Volume: 13 Pages: e0179

    • DOI

      10.1199/tab.0179

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] チューブリンリン酸化酵素PHS1 はMAPK を介さずにリン酸化活性を抑制する2016

    • Author(s)
      Coleman Duncan,堀田 崇,橋本 隆
    • Organizer
      第57回日本植物生理学会年会
    • Place of Presentation
      信州大学(長野県上田市)
    • Year and Date
      2016-03-18 – 2016-03-20
  • [Presentation] 器官のねじれ形質への各細胞層の寄与2016

    • Author(s)
      加藤 壮英,市村 朋子,平井 祐貴,足立 侑実子,寳金 佐和子,藤田 智史,八木 慎宜,橋本 隆
    • Organizer
      第57回日本植物生理学会年会
    • Place of Presentation
      信州大学(長野県上田市)
    • Year and Date
      2016-03-18 – 2016-03-20
  • [Presentation] 精製植物チューブリンを用いた微小管のin vitroダイナミクス解析2016

    • Author(s)
      堀田 崇,内村 誠一,野口 真大,出村 拓,武藤 悦子,橋本 隆
    • Organizer
      第57回日本植物生理学会年会
    • Place of Presentation
      信州大学(長野県上田市)
    • Year and Date
      2016-03-18 – 2016-03-20
  • [Presentation] 高浸透圧ストレスに応答したゼニゴケの表層微小管脱重合2016

    • Author(s)
      高橋 英之,長尾 直弥,西浜 竜一,河内 孝之,橋本 隆
    • Organizer
      第57回日本植物生理学会年会
    • Place of Presentation
      信州大学(長野県上田市)
    • Year and Date
      2016-03-18 – 2016-03-20
  • [Presentation] ダイナミックな微小管細胞骨格は植物細胞の形を作り出し、環境ストレスに応答する2015

    • Author(s)
      橋本隆
    • Organizer
      第53回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      金沢大学(石川県金沢市)
    • Year and Date
      2015-09-12 – 2015-09-15
    • Invited
  • [Presentation] Plant responses to drought by the cytoskeleton remodeling2015

    • Author(s)
      Takashi Hashimoto
    • Organizer
      Annual Academic Meeting of Korean Society for Plant Biotechnology
    • Place of Presentation
      Korean Cultural Center(Chungnam Province, Korea)
    • Year and Date
      2015-06-17 – 2015-06-19
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Remarks] 橋本研ホームページ

    • URL

      http://bsw3.naist.jp/hashimoto/

URL: 

Published: 2018-01-16  

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