2017 Fiscal Year Annual Research Report
ncRNAの細胞内局在に基づいたネオタクソノミの確立
| Project Area | Neo-taxonomy of noncoding RNAs |
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| Project/Area Number |
26113004
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
塩見 美喜子 東京大学, 大学院理学系研究科(理学部), 教授 (20322745)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大野 睦人 京都大学, ウイルス・再生医科学研究所, 教授 (80201979)
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| Project Period (FY) |
2014-07-10 – 2019-03-31
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| Keywords | ncRNA / 細胞内局在 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
＜塩見＞piRNAは、遺伝子間領域に存在するpiRNAクラスタから転写されるncRNAの前駆体とする。我々はこれまでショウジョウバエ卵巣由来体細胞OSCを用いてpiRNA前駆体の選択に関わるシス作動エレメントの同定に成功した。このシス作動エレメントの解析をさらにすすめることによって、コンセンサス配列を決定するとともに、piRNAと内在性siRNAの生成機構の交差性に関する研究をつづける。OSCにおける翻訳阻害の条件を決定するために時間を要したが、その条件が整った。また、その条件下においてCLIPを行い、Ybに結合するRNAの塩基配列を決定するlibraryの作成に成功した。生物情報学的な解析を進める準備も整ったため、来年度に実行する。Piwi核移行因子、及びその制御機構に関しては、論文にまとめ、投稿中である。Piwi核移行因子としては、Importin alphaであることが判明した。しかし、Piwiは、piRNAと結合しない場合は、Importin alphaが存在しても核に移行しない。この制御機構を理解するために限定分解を行なったところ、piRNAと結合していないPiwiのN末端は、Piwiによって隠されておりアクセスできないことが判明した。
＜大野＞マウスNeat1_1 RNA中に、このRNAの核内保持に必須である約800塩基長の領域を同定した。この領域に結合する因子群を生化学的に探索した結果、mRNA前駆体のスプライシング因子が複数同定された。このことから、Neat1 RNAはスプライシングを受けないにもかかわらず、その核内保持がmRNA前駆体の核内保持と共通の機構で行われるという興味深い仮説が浮かび上がってきた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
＜塩見＞Piwiの核以降に関する研究に関しては、論文を投稿済みである。 シス作動エレメントの同定に関しては、翻訳阻害実験の条件が整い、その条件下においてYbに結合するRNA配列の決定まで行うことができた。今後は、生物情報学的な解析を進める。
＜大野＞本年度は、Neat1 RNAの核内保持機構について研究が大きく進展し、興味深くかつ検証可能な作業仮設が浮かび上がってきた。
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| Strategy for Future Research Activity |
＜塩見＞シス作動エレメントの同定に関しては、翻訳阻害実験の条件が整い、その条件下においてYbに結合するRNA配列の決定まで行うことができたため、今後は、生物情報学的な解析を進める。得られた結果を元に、検証実験を進め、期待されるような結果が得られた時点で論文執筆に取り掛かる。
＜大野＞上記の興味深い作業仮設を実験的に検証し、Neat1 RNAの核内保持の分子機構を明らかにする。
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