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2016 Fiscal Year Annual Research Report

新生鎖テイルアンカー型タンパク質(TA)の輸送・膜挿入と品質管理

Planned Research

Project AreaNascent-chain Biology
Project/Area Number 26116007
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

藤木 幸夫  九州大学, 生体防御医学研究所, 特任教授 (70261237)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 田村 茂彦  九州大学, 基幹教育院, 教授 (90236753)
Project Period (FY) 2014-07-10 – 2019-03-31
Keywords新生鎖 / テイルアンカー型タンパク質 / オルガネラ選別輸送 / 膜挿入機構 / 品質管理機構
Outline of Annual Research Achievements

リボゾームで翻訳されたテイルアンカー型膜タンパク質(TA) はサイトゾルへ放出され、各オルガネラ膜へ直接輸送される。TAの翻訳後輸送は各々の局在先によって異なる分子機構を必要とし、TAの運命決定はリボソームでの新生鎖翻訳時およびその直後から品質管理を含めた形で実行されると考えられているが、その分子機構は不明な点が多い。本領域課題研究では、TAをモデルとしたリボソーム翻訳時における新生鎖の運命決定機構およびオルガネラ選別輸送・膜挿入の分子機構を解明することを目的としている。
H28年度は改変型ペルオキシソーム局在性モデルTAのBag6複合体およびPex19pとの結合、in vivoにおける細胞内局在およびタンパク質安定性の解析を統合的に行った。また、H27年度研究で同定したペルオキシソーム局在性TAのサイトゾル局在性結合タンパク質に関して種々の解析を行い、新生鎖TAのペルオキシソーム輸送およびTAの運命決定における役割を解明しつつある。
また、関連した特筆すべき成果を以下に記載する。過酸化水素分解酵素カタラーゼをはじめとするペルオキシソーム内腔タンパク質の輸送障害性CHO変異細胞ZP114の相補遺伝子として、ミトコンドリア外膜タンパク質(ポリン)をコードするVDAC2を単離した。詳細な解析の結果、VDAC2を受容体としてミトコンドリアに輸送され、アポトーシス促進因子として機能するTAの1つである BAKがVDAC2欠損によりペルオキシソームにも一部局在化し、カタラーゼをペルオキシソームからサイトゾルへ移出させることを発見した。ペルオキシソーム局在性BAKの活性化はカタラーゼの放出を介して抗酸化ストレス反応として作用するという世界で初めてのアポトーシス制御機構を明らかにし、一流国際誌に発表、大きな反響を得た(J. Cell Biol. 216: 709-721, 2017)。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

新生鎖TAの認識機構およびオルガネラ選別輸送について、新規同定したペルオキシソームTAと特異的に結合するとみられるタンパク質を含め、Pex19pを介したペルオキシソームTAの認識、輸送機構を明らかにしつつある。さらにBag6複合体を介した小胞体局在性TAとの比較を通じて、新生鎖TA合成時のオルガネラ選別および品質管理システムについて新たな知見を得ている。また、上記研究実績に記載したように、ミトコンドリア局在性TAでありアポトーシス促進因子として知られているBAKがペルオキシソームにも一部局在化し、カタラーゼのペルオキシソームからサイトゾルへの放出させることで、酸化ストレス抵抗性および抗細胞死作用を発揮することを発見した。この極めて重要な知見は、J. Cell Biol.誌に“Spotlight”とともに公表、その発見の意義と重要性については、Proc. Natl. Acad. Sci. USA誌の“Journal Club”やMol. Cell. Oncol.誌の“Author's View"などで大きく取上げられ高い評価を得ている。

Strategy for Future Research Activity

① 新生鎖TAの認識および品質管理システムの解明
これまでに、無細胞翻訳系と中性条件下でのSDS-PAGEによる分離による翻訳途上新生鎖TAの検出系を確立している。引き続きこの実験系を用いて種々の改変型ペルオキシソーム局在性モデルTA の翻訳速度解析を行い、翻訳速度に影響するアミノ酸配列の同定や翻訳速度と細胞内局在の関連性等を明らかにする。また、小胞体TAやミトコンドリアTAを含めて、翻訳速度がどのようにタンパク質安定性や細胞内局在に影響するのかを検討し、Bag6複合体やPex19p等の関与等の解析を併せて新生鎖TA の認識および翻訳速度調節を伴う品質管理システムを解明する。
② 新生鎖TAのオルガネラ選別輸送の解明
これまでの研究により、ペルオキシソーム局在性TAとPex19pの複合体に特異的に結合するサイトゾルタンパク質を同定しており、その結合様式を明らかにしつつある。従って、この新規同定因子がペルオキシソームTAに対して、小胞体TAにおけるBag6に相当する機能を担うことが想定される。Bag6および新規同定因子をそれぞれCRISPR/Cas9を用いたゲノム編集によりノックアウトした細胞株を樹立し、新生鎖TAのペルオキシソーム輸送における新規同定タンパク質の役割をin vivoで解析する。また、ペルオキシソーム欠損症患者由来の変異導入による不安定型ペルオキシソーム局在性TAとの比較によりタンパク質安定性や細胞内局在を検討し、TA輸送における品質管理機構を解明する。

  • Research Products

    (36 results)

All 2017 2016 Other

All Journal Article (9 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 9 results,  Acknowledgement Compliant: 9 results,  Open Access: 3 results) Presentation (18 results) (of which Int'l Joint Research: 8 results,  Invited: 2 results) Book (8 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Peroxisome biogenesis: a novel inducible PEX19 splicing variant is involved in early stages of peroxisome proliferation.2017

    • Author(s)
      Kinoshita, N., Matsuura, A., and *Fujiki, Y.
    • Journal Title

      J. Biochem.

      Volume: 161 Pages: 297-308

    • DOI

      10.1093/jb/mvw075

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Deficiency of a retinal dystrophy protein, acyl-CoA binding domain-containing 5 (ACBD5), impairs peroxisomal β-oxidation of very-long-chain fatty acids.2017

    • Author(s)
      Yagita, Y., Shinohara, K., Liu, Y., and *Fujiki, Y.
    • Journal Title

      J. Biol. Chem.

      Volume: 292 Pages: 691-705

    • DOI

      10.1074/jbc.M116.760090

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] The VDAC2-BAK axis regulates peroxisomal membrane permeability.2017

    • Author(s)
      Hosoi, K., Miyata, N., Mukai, S., Furuki, S., Okumoto, K., Cheng, E. H., and *Fujiki, Y.
    • Journal Title

      J. Cell Biol.

      Volume: 216 Pages: 709-722

    • DOI

      10.1083/jcb.201605002

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Defining dynamin-based ring organizing center on the peroxisome-dividing machinery isolated from Cyanidioschyzon merolae.2017

    • Author(s)
      Imoto, Y., Abe, Y., Okumoto, K., Honsho, M., Kuroiwa, H., Kuroiwa, T., and *Fujiki, Y.
    • Journal Title

      J. Cell Sci.

      Volume: 130 Pages: 853-867

    • DOI

      10.1242/jcs.199182

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Localization of NDR2 to peroxisomes and its role in ciliogenesis.2017

    • Author(s)
      Abe, S., Nagai, T., Masukawa, M., Okumoto, K., Homma, Y., Fujiki, Y., and *Mizuno. K.
    • Journal Title

      J. BIol. Chem.

      Volume: 292 Pages: 4089-4098

    • DOI

      10.1074/jbc.M117.775916

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Plasmalogen synthesis is spatiotemporally regulated by sensing plasmalogens in the inner leaflet of plasma membrane.2017

    • Author(s)
      Honsho, M., Abe, Y., and *Fujiki, Y.
    • Journal Title

      Sci. Rep.

      Volume: 7 Pages: 43936

    • DOI

      10.1038/srep43936

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Peroxisome homeostasis: mechanisms of division and selective degradation of peroxisomes in mammals.2016

    • Author(s)
      Honsho, M., Yamashita,S., and *Fujiki, Y.
    • Journal Title

      Biochim. Biophys. Acta-Mol. Cell Res.

      Volume: 1863 Pages: 984-991

    • DOI

      10.1016/j.bbamcr.2015.09.032

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Assembly of peroxisomal membrane proteins via the direct Pex19p-Pex3p pathway.2016

    • Author(s)
      Liu, Y., Yagita, Y., and *Fujiki, Y.
    • Journal Title

      Traffic

      Volume: 17 Pages: 433-455

    • DOI

      10.1111/tra.12376

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Peroxisome biogenesis and human peroxisome-deficiency disorders.2016

    • Author(s)
      Fujiki, Y.
    • Journal Title

      Proc. Jpn. Acad., Ser. B

      Volume: 92 Pages: 463-477

    • DOI

      10.2183/pjab.92.463

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] Core components of peroxisomal membrane translocator of matrix proteins2017

    • Author(s)
      Yukio Fujiki, Yuko Kawamura, and Shigehiko Tamura
    • Organizer
      EMBO Conference: Protein translocation and cellular homeostasis
    • Place of Presentation
      Hotel Valamar Lacroma, Dubrovnik, Croatia
    • Year and Date
      2017-03-18 – 2017-03-22
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Peroxisomal matrix protein transport requires a series of constitutional changes of Pex14p homo-oligomers.2017

    • Author(s)
      Yukio Fujiki, Yuko Kawamura, and Shigehiko Tamura
    • Organizer
      EMBO Conference: Protein translocation and cellular homeostasis
    • Place of Presentation
      Hotel Valamar Lacroma, Dubrovnik, Croatia
    • Year and Date
      2017-03-18 – 2017-03-22
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Biogenesis of peroxisome: assembly of nascent membrane proteins2016

    • Author(s)
      Yuqiong Liu, Yuichi Yagita, Kanji Okumoto, Kyoko Shinohara, Aiko Nagata, and Yukio Fujiki
    • Organizer
      2016 ASCB Annual Meeting
    • Place of Presentation
      Moscone Center, San Fransisco,California, USA
    • Year and Date
      2016-12-03 – 2016-12-06
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Peroxisome biogenesis: Import of nascent membrane and matrix proteins2016

    • Author(s)
      Yuqiong Liu, Shigehiko Tamura, Kanji Okumoto, Yuichi Yagita, Yuko Kawamura, Aiko Nagata, and Yukio Fujiki
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      横浜パシフィコ、横浜市
    • Year and Date
      2016-11-30 – 2016-12-02
  • [Presentation] ペルオキシソーム膜透過輸送にはPex14p複合体の動的な構成変化が必要である2016

    • Author(s)
      河村優子, 田村茂彦, 藤木幸夫
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      横浜パシフィコ、横浜市
    • Year and Date
      2016-11-30 – 2016-12-02
  • [Presentation] アストロサイトにおけるペルオキシソーム形成障害による神経軸索形成異常2016

    • Author(s)
      阿部雄一, 川口怜子, 廣兼正明, 藤原一志郎, 本庄雅則, 松崎高志, 藤谷昌司, 山下俊英, 藤木幸夫
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      横浜パシフィコ、横浜市
    • Year and Date
      2016-11-30 – 2016-12-02
  • [Presentation] Plasmalogen synthesis is spatiotemporally regulated by sensing plasmalogens in the inner leaflet of plasma membrane2016

    • Author(s)
      Masanoi Honsho, Yuichi Abe, and Yukio Fujiki
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      横浜パシフィコ、横浜市
    • Year and Date
      2016-11-30 – 2016-12-01
  • [Presentation] Peroxisome Homeostasis, Dysfunctions, and Disorders2016

    • Author(s)
      Yukio Fujiki
    • Organizer
      The 1st INTERNATIONAL PLASMALOGEN SYMPOSIUM
    • Place of Presentation
      Centennial Hall Kyushu University School of Medicine, Fukuoka
    • Year and Date
      2016-11-07 – 2016-11-08
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Plasmalogen Synthesis Is Spatiotemporally Regulated by Sensing Plasmalogens in the Inner Leaflet of Plasma Membrane2016

    • Author(s)
      Masanori Honsho, Yuichi Abe, and Yukio Fujiki
    • Organizer
      The 1st INTERNATIONAL PLASMALOGEN SYMPOSIUM
    • Place of Presentation
      Centennial Hall Kyushu University School of Medicine, Fukuoka
    • Year and Date
      2016-11-07 – 2016-11-08
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Lipidomic Analysis of Fibroblasts from Patients with Peroxisome Biogenesis Deficiency and PEX Gene-Knockout Mouse2016

    • Author(s)
      Yuichi Abe, Masanori Honsho, and Yukio Fujiki
    • Organizer
      The 1st INTERNATIONAL PLASMALOGEN SYMPOSIUM
    • Place of Presentation
      Centennial Hall Kyushu University School of Medicine, Fukuoka
    • Year and Date
      2016-11-07 – 2016-11-08
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] DHRS7B Targets to Peroxisomes by a PEX19-dependent Class I Pathway2016

    • Author(s)
      Megumi Tanaka, Masanori Honsho, and Yukio Fujiki
    • Organizer
      The 1st INTERNATIONAL PLASMALOGEN SYMPOSIUM
    • Place of Presentation
      Centennial Hall Kyushu University School of Medicine, Fukuoka
    • Year and Date
      2016-11-07 – 2016-11-08
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Identification of core components of peroxisomal membrane translocator2016

    • Author(s)
      Shigehiko Tamura, Yuko Kawamura, and Yukio Fujiki
    • Organizer
      第89回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      仙台国際センター/東北大学川内北キャンパス、仙台市
    • Year and Date
      2016-09-25 – 2016-09-27
  • [Presentation] 超分子ナノマシンPeroxisome-dividing ringの形成起点同定とGTP濃度依存的伸長機構の解明2016

    • Author(s)
      井元祐太, 阿部雄一, 奥本寛治, 本庄雅則, 黒岩晴子, 黒岩常祥, 藤木幸夫
    • Organizer
      第89回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      仙台国際センター/東北大学川内北キャンパス、仙台市
    • Year and Date
      2016-09-25 – 2016-09-27
  • [Presentation] ペルオキシソーム局在型Miro1バリアントによるペルオキシソームの細胞内移動制御2016

    • Author(s)
      奥本寛治, 小野立晃, 下村紋子, 外山隆介, 藤木幸夫
    • Organizer
      第89回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      仙台国際センター/東北大学川内北キャンパス、仙台市
    • Year and Date
      2016-09-25 – 2016-09-27
  • [Presentation] ペルオキシソーム分裂装置の構造と機能解析2016

    • Author(s)
      井元祐太, 阿部雄一, 奥本寛治, 本庄雅則, 黒岩晴子, 黒岩常祥, 藤木幸夫
    • Organizer
      第80回大会日本植物学会
    • Place of Presentation
      沖縄コンベンションセンター、宜野湾市
    • Year and Date
      2016-09-16 – 2016-09-19
  • [Presentation] Plasmalogen synthesis is spatiotemporally regulated by sensing plasmalogens in plasma membrane2016

    • Author(s)
      Masanori Honsho, Yuichi Abe, and Yukio Fujiki
    • Organizer
      5th Open European Peroxisome Meeting 2016
    • Place of Presentation
      Medical University of Vienna,Vienna, Austria
    • Year and Date
      2016-09-14 – 2016-09-16
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Ultrastructure and molecular mechanism of Ring-shaped Supramolecular Nanomachinery for Peroxisome Division Revealed by Single Organelle EM Analysis2016

    • Author(s)
      Yuuta Imoto, Yuichi Abe, Masaki Yoshida, Masanori Honsho, Kanji Okumoto, Mio Ohnuma, Haruko Kuroiwa, Tsuneyoshi Kuroiwa, and Yukio Fujiki
    • Organizer
      1st Cyanidioschyzon merolae Symposium
    • Place of Presentation
      東京大学、東京都
    • Year and Date
      2016-07-04 – 2016-07-04
  • [Presentation] オルガネラ恒常性とその障害の分子基盤2016

    • Author(s)
      藤木幸夫
    • Organizer
      H28年度日本生化学会九州支部例会
    • Place of Presentation
      鹿児島大学、 鹿児島市
    • Year and Date
      2016-05-14 – 2016-05-15
    • Invited
  • [Book] Analysis of plasmalogen synthesis in cultured cells. In: Schrader, M. (ed.) Peroxisomes: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology (Series Ed.: Walker, J.M.)2017

    • Author(s)
      Honsho, M., and Fujiki, Y.
    • Total Pages
      7
    • Publisher
      Springer, Humana Press, New York, USA
  • [Book] Experimental systems to study yeast pexophagy. In: Schrader, M. (ed.) Peroxisomes: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology (Series Ed.: Walker, J.M.)2017

    • Author(s)
      Yamashita, S., Oku, M., Sakai, Y., and Fujiki, Y.
    • Total Pages
      7
    • Publisher
      Springer, Humana Press, New York, USA
  • [Book] In vitro PMP import analysis using cell-free synthesized PMP and isolated peroxisomes. In: Schrader, M. (ed.) Peroxisomes: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology (Series Ed.: Walker, J.M.)2017

    • Author(s)
      Liu,Y., Honsho, M., and Fujiki, Y.
    • Total Pages
      6
    • Publisher
      Springer, Humana Press, New York, USA
  • [Book] Generation of peroxisome-deficient somatic animal cell mutants. In: Schrader, M. (ed.) Peroxisomes: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology (Series Ed.: Walker, J.M.)2017

    • Author(s)
      Okumoto, K., and Fujiki, Y.
    • Total Pages
      9
    • Publisher
      Springer, Humana Press, New York, USA
  • [Book] Peroxisomal membrane and matrix protein import using a semi-intact mammalian cell system. In: Schrader, M. (ed.) Peroxisomes: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology (Series Ed.: Walker, J.M.)2017

    • Author(s)
      Okumoto, K., Honsho, M., Liu, Y., and Fujiki, Y.
    • Total Pages
      7
    • Publisher
      Springer, Humana Press, New York, USA
  • [Book] Assessing pexophagy in mammalian cells. In: Schrader, M. (ed.) Peroxisomes: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology (Series Ed.: Walker, J.M.)2017

    • Author(s)
      Yamashita, S., and Fujiki, Y.
    • Total Pages
      6
    • Publisher
      Springer, Humana Press, New York, USA
  • [Book] Blue-Native PAGE: Applications to study on peroxisome biogenesis. In: Schrader, M. (ed.) Peroxisomes: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology (Series Ed.: Walker, J.M.)2017

    • Author(s)
      Okumoto, K., Tamura, S., and Fujiki, Y.
    • Total Pages
      9
    • Publisher
      Springer, Humana Press, New York, USA
  • [Book] 別冊・医学のあゆみ ストレスシグナルと疾患―細胞恒常性維持機構の破綻と病態 『ペルオキシソーム形成異常と疾患』2016

    • Author(s)
      藤木幸夫, 奥本寛治, 本庄雅則
    • Total Pages
      5
    • Publisher
      医歯薬出版株式会社
  • [Remarks] 生体防御医学研究所 オルガネラホメオスタシス研究室

    • URL

      http://www.organelle.kyushu-u.ac.jp/lab/organellestasis/index.html

URL: 

Published: 2018-01-16  

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