1991 Fiscal Year Annual Research Report
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01060003
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
村上 和雄 筑波大学, 応用生物化学系, 教授 (70110517)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
深水 昭吉 筑波大学, 応用生物化学系, 講師 (60199172)
中山 和久 筑波大学, 生物科学系, 講師 (40192679)
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| Keywords | レニン / プロレニン / 遺伝子工学 / プロテイン・エンジニアリング / 発生工学 / プロセッシング / トランスジェニック・マウス / 組織特異的発現 |
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| Research Abstract |
1)組換え型ヒト・レニンのX線結晶解析
前年度までに調整した組換え型ヒト・レニンの結晶標品について、そのX線の回析デ-タの測定を本年度でほぼ完了し、現在refinementを行っている。
2)プロティン・エンジニアリング
プロレニンの組織特異的な活性化のメカニズムを明らかにするため、プロレニンの切断認識部位(LysーArg)周辺のアミノ酸配列の異なるプロレニン変異体を作製し、そのプロセッシング活性を調べた結果、プロレニンの切断部位(↓)のーLysーArgー^^↓Proーのproが、組織特異的なプロセッシングに重要な役割を演じていることが判明した。
3)プロレニン活性化酵素
プロレニンはレニンに組織特異的に活性化されていることが判明したので、現在、プロホルモン、前駆体タンパク質のプロセッシング酵素として、唯一知られている酵母のKex2プロテア-ゼと相同性のあるタンパク質のcDNAをクロ-ニングした。このタンパク質(PC3)は、脳下垂体由来のAtTー20のプロホルモン・プロセシング酵素であると予想された。この酵素をプロレニンと共に培養細胞で発現させた結果、プロレニンをレニンにプロセシングする活性を持った。
4)トランスジェニック・マウスの作製とその解析
ヒト・レニンの基質であるヒト・アンジオテンシノ-ゲン及びその遺伝子を持ったマウスを作製した。ヒト・アンジオテンシノ-ゲンは、主な生産場所である肝臓だけでなく、腎臓においても大量に発現していた。さらに、ヒト・レニンとヒト・アンジオテンシノ-ゲン及びその遺伝子の両方を持ったマウスを作製した。このマウスでの外来遺伝子の遺伝子の発現調節機構、血圧の変動等を追跡中である。
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[Publications] Masami Nagahama et al.: "Sequence requirements for prohormone processing in mouse pituitary AtT-20 cells" Eur.J.Biochem.197. 135-140 (1991)
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[Publications] Masahiro Hosaka et al.: "Arg-X-Lys/Arg-Arg motif as a signal for precursor cleavage catalyzed by furin within the constitutive secretory pathway" The journal of Biological chemistry. 266(19). 12127-12130 (1991)
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[Publications] Akiyoshi Fukamizu et al.: "Human renin in transgenic mouse kidney is localized to juxtaglomerular cells" Biochem.J.278. 601-603 (1991)
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[Publications] W.S.Kim et al.: "Mouse submandibular gland prorenin-converting enzyme is a member of grandular kallikrein family" J.Biol.Chem.266(29). 19283-19287 (1991)
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[Publications] M.S.Seo et al.: "Identification of a previously unrecognized production site of human renin" Biochemica et Biophysica Acta. 1129. 87-89 (1991)
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[Publications] Shigeru Takahashi et al.: "Expression of the human angiotensinogen gene in transgenic mice and transfected cells" Biochem.Biophys.Res.Commun.182(2). 1103-1109 (1991)
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[Publications] 深水 昭吉,村上 和雄: "実験医学" (株)羊土社, 7 (1990)
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[Publications] 宮崎 均、近藤 元宏、村上 和雄: "ホルモンと臨床" (有)医学の世界社, 6 (1991)
