膜タンパク質の疎水性アンカ-としてのPIの生物学的意義

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01300015
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 池沢 宏郎 名古屋市立大学, 薬学部, 教授 (40080163)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 武居 能樹 岐阜大学, 教養部, 教授 (50023651) ; 富田 基郎 昭和大学, 薬学部, 教授 (30102370) ; 池原 征夫 福岡大学, 医学部, 教授 (70037612) ; 中島 泉 名古屋大学, 医学部, 教授 (40022826) ; 鬼頭 誠 京都大学, 食糧科学研究所, 教授 (60027183)
• Keywords: PIアンカ- / 膜蛋白質 / ホスファチジルイノシト-ル / 疎水性アンカ- / 発作性夜間血色素尿症

Research Abstract

12名の研究者により、本年度に以下のような研究成果が得られた。
1.生化学的側面の研究。PIPLCにより遊離されたカイコのアミノペプチダ-ゼN、ウシ肝5'-ヌクレオチダ-ゼを精製し、さらに5'-ヌクレオチダ-ゼのcDNAのクロ-ニングを行い、全アミノ酸配列の9割を確定し、C末疎水アミノ酸配列の部分をほぼ同定した。また昆虫培養細胞TN-368のβ-グルコシダ-ゼがPIアンカ-蛋白であることを発見した(池沢)。蛋白合成系における延長因子EF-1αがPIアンカ-により小胞体膜に結合していることを発見した(鬼頭)。ラット肝及びヒト胎盤5'-ヌクレオチダ-ゼのcDNAクロ-ニングを完了し、それぞれの全一次構造を決定し、これらの蛋白質C末端PI結合部位の同定並びにPI複合体の組成分析を完了した(池原)。補体制御蛋白MACIFのcDNAをクロ-ニングし、アミノ酸配列のC末部からPIアンカ-の蛋白であると結論した(富田)、ウサギ小腸のトレハラ-ゼに対するモノクロ-ナル抗体5標品を得た(武居)。PIアンカ-酵素であるアルカリ性ホスホジエステラ-ゼIが、酪酸ナトリウムによりKBIII細胞で高レベルに誘導されることを見出した(中林)。腫瘍マ-カ-のうちでCal25分子にPIアンカ-が存在する可能性を見出した(菰田)。
2.免疫学的または病理学的側面の研究。PI結合膜蛋白であるアロThyー1抗原の特徴的な免疫活性がPIPLCに対して高い感受性を示すThy-1抗原の特徴的な免疫活性がPIPLCに対して高い感受性を示すことから、この活性の発現にPI膜結合が重要な役割を担うことを明らかにした(中島)。赤血球の抗原HRF-20がPIアンカ-抗原であることを明らかにした(岡田)。発作性夜間血色素尿症PNHの異常がDAFあるいはHRF-20の欠損によるらしいことを発見した(藤田)。ヒトPNH患者でDAFが正常、IF5抗原欠損の特異な症例を発見した(田口)。アルカリ性ホスファタ-ゼの単クロ-ン抗体を樹立した(上出)。

Research Products

• [Publications] Hiroh Ikezawa et al.: "Release of PI-anchoring enzymes and other effects of phosphatidylinositol-specific phospholipase C from Bacillus thuringiensis on TN-368 cells from a moth ovary" Toxicon. 27. 637-645 (1989)
• [Publications] Yukako Hayashi et al.: "Anchoring of peptide elongation factor EF-1α by phosphatidylinositol at the endoplasmic reticulum membrane" Journal of Biochemistry(Tokyo). 106. 560-563 (1989)
• [Publications] Toshio Miyata et al.: "Rat mesangial cells actively produce phosphatidylinositol-anchoring Thy-1" Immunology. 67. 531-553 (1989)
• [Publications] Yoshio Misumi et al.: "Primary structure of rat liver 5'-nucleotidase deduced from the cDNA:Presence of the COOH-terminal hydrophobic domain for possible post-translational modification by glycophospholipid" Journal of Biological Chemistry. 265. (1990)
• [Publications] Shigenori Ogata et al.: "Isolation and characterization of the membrane-anchoring domain of rat liver 5'-nucleotidase:Identification of the COOH-terminal serine-523 covalently atached with glycosyl-phosphatidylinositol" Journal of Biological Chemistry.
• [Publications] Yuji Sugita: "Molecular cloning and characterization of MACIF,an inhibitor of membrane channel formation of complement" Journal of Biochemistry(Tokyo). 106. 555-557 (1989)
• [Publications] Noriko Okada et al.: "A novel membrane glycoprotein capable of inhibiting membrane attack by homologous complement" International Immunology. 1. 205-208 (1989)
• [Publications] Haruhiko Ninomiya et al.: "Prolongation of red-cell life-span by incorporation of decay-accelerating factor(DAF)into red cells of paroxysmal nocturnal haemoglobinuria(PNH)" British Journal of Haematology. 73. 132-133 (1989)
• [Publications] Ryo Taguchi et al.: "Analysis of phosphatidylinositol(PI)-anchoring antigens in a patient of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria(PNH)reveals deficiency of 1F5 antigen(CD59),a new complement-regulatory factor" FEBS Letter. in press. (1990)
• [Publications] 武居幸子 他: "カイコ幼虫中腸の膜結合アミノペプチダ-ゼNのホスファチジルイノシト-ル特異的ホスホリパ-ゼCによる可溶化" 名古屋大学環境医学研究所年報. 41. (1990)
• [Publications] Tsugikazu Komoda et al.: "Allelic and ectopic polymorphisms in human placental alkaline phosphatases:Sugar chain heterogeneities" Clinica Chimica Acta. 186. 203-210 (1989)
• [Publications] Noriharu Shijubo et al.: "Functional analysis of mononuclear cell infiltrating into tumor.V.A soluble factor involved in the regulation of cytotoxic/suppressor T cell infiltration into tumors" Journal of Immunology. 142. 2961-2967 (1989)