1989 Fiscal Year Annual Research Report
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01440018
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
安田 健次郎 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (90050327)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
塩沢 昌英 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (50170840)
山下 修二 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (90050666)
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| Keywords | 癌胎児性蛋白 / γ-GTP / ノザンハイブリダイゼ-ション / mRNA / in situ hybridization |
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| Research Abstract |
癌胎児性蛋白は癌及び胎児期に特異的に発現する蛋白であり、γーGTP、AFPらが知られているが、その役割に関しては未知の部分が多い。我々はγGTPを例にとり、胎生期の存在様式即ち分布と、成体での再発現時の分布をmRNAレベル及び蛋白レベルで比較検討することにより、癌胎児性蛋白の産生の過程および再発現の原因を解明せんとするのが本研究の目的である。
胎齢12w、19w、20w、24w、40wのヒト胎児肝を塩酸グアニジン溶液でつぶし、5.7MCscl液に重層後、35000γpm、15時間遠心後、total RNAを得た。更にOligotexdT30を用いて、polyA^+RNAを精製した。このpolyA^+RNAを用いて、ヒトγGTPcDNAをプロ-ブとしてノザンハイブリダイゼ-ションを行ったところ、胎齢12wですでにその発現を認め、胎齢が進むにつれ、その発現量は増加し、40wをピ-クとしていた。ヒトγGTPの転写産物の大きさは2.7kbであり、ヒト胎児腎、ヒト肝臓癌、肝癌のcell lineであるHepGIIより検出できたbandと同じサイズであった。また、我々の作成したヒトγGTPのモノクロ-ナル抗体を用いて、蛋白レベルでの検索を行ったところ、胎齢8wですでにその発現を認め、胎齢24wでは肝細胞の細胞膜全周性に免疫組織化学的反応が得られ、この挙動は腎の近位尿細管における変化に類似する。
更にSP6プロモ-タ-を有するベクタ-にヒトγGTPcDNAを組み込み、anti-senseRNAプロ-ブを作成し、ヒト胎児肝のpolyA^+RNAとhybridizationを行ったところ、通常のプロ-ブ作成方法よりも非常に強いシグナルを検出できた。現在、平成元年度に購入したDNAシ-クエンス入力解析システム(日立)を用いて、特異性の高いfragmentを選択し、そのfragmentをプロ-ブとして、in situ hybridizationを行うところである。
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[Publications] Kenjiro Yasuda,Shuji Yamashita,and Masahide Shiozawa: "An experimental study on the application of microwave fixation to immunohistochemical studies" Acta histochem.cytochem.22. 91-103 (1989)
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[Publications] Masahide Shiozawa,Shuji Yamashita,Sadakazu Aiso,and Kenjiro Yasuda: "A monoclonal antibody against human kidney gamma-glutamyl transpeptidase;preparation,immunochemical and immunohistochemical characterization" J.Histochem.Cytochem.37. 1053-1061 (1989)
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[Publications] Kenjiro Yasuda,Sadakazu Aiso,Takashi Nagatani,and Mitsuhiko Yamada: "Direct observation of immunoreactive sites and antibody molecules by ultra high resolution scanning electron microscope" J.Electron Microscopy Technique. 12. 155-159 (1989)
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[Publications] Sadakazu Aiso,Kenjiro Yasuda,Masahide Shiozawa,Hisashi Yamamoto and Takashi Sogo: "Preparation of monoclonal antibodies to glutathione S-transferase-π and its application to immunohistochmistry" J.Histochem.Cytochem.37. 1247-1252 (1989)
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[Publications] Shuji Yamashita,Sadakazu Aiso,Masahide Shiozawa,and Kenjiro Yasuda: "Immunohistochemical study of gamma-glutamyl transpeptidase with monoclonal antibodies.II.An immunoelectron microscopic study in rat kidney" Acta histochem.cytochem. 22. 367-374 (1989)
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[Publications] Kenjiro Yasuda,Masahide Shiozawa,Sadakazu Aiso,Shozo Taniguchi and Shuji Yamashita: "Distribution of gamma-glutamyl transpeptidase in human pancreas:Immunohistochemical study with monoclonal antibody" J.Histochem.Cytochem.38. 339-350 (1990)
