1990 Fiscal Year Annual Research Report
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01440018
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
安田 健次郎 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (90050327)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
塩沢 昌英 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (50170840)
山下 修二 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (90050666)
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| Keywords | 癌胎児性蛋白 / γGTP / ノザンハイブリダイゼ-ション / mRNA / in situ hybridization |
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| Research Abstract |
癌胎児性蛋白は癌及び胎児期に特異的に発現する蛋白であり、γGTP、AFPらが知られているが.その役割に関しては未知の部分が多い。我々はγGTPを例にとり、胎生期の存在様式、即ち分布と、成体での再発現時の分布をmRNAレベル及び蛋白レベルで比較検討することにより、癌胎児性蛋白の産生の過程および再発現の原因を解明せんとするのが本研究の目的である。
昨年度までに胎児期におけるγGTPの発現過程をmRNAレベルに関してはノザン・ハイブリダイゼ-ションを用いて、また、蛋白レベルに関してはヒトγGTPに対するモノクロ-ナル抗体を用いた免疫組織化学的手法により明らかにした。平成2年度はヒトγGTPcDNAをプロ-ブとして、ヒト各種臓器でin situ hybridizationを行うためにプロ-ブとして用いるフラグメントの決定と、in situ hybridizationの条件検討を行った。
平成元年度に購入したDNAシ-クエンス入力解析システム(日立)を用いて、特異性の高いフラグメントを選択したところ、ヒトγGTPcDNAのBamH1ーPst1フラグメントが最も特異性が高かったためこのフラグメントをSP6プロモ-タ-を有するベクタ-に組み込み、antiーsenseRNAプロ-ブを作成し、ノザン・ハイブリダイゼ-ションとラット腎を用いてin situ hybridizationを行ったところ、ノザン・ハイブリダイゼ-ションでは高感度にγGTP由来のmRNAが検出でき、ラット腎におけるin situ hybridizationでは尿細管に特異的なシグナルを認め、糸球体には非特異反応は全く認められなかった。
現在、ラット腎におけるin situ hybridizationの条件を用いて、ヒト胎児肝、成人肝に対してin situ hybridizationを行い、γGTPの発現の消長過程を検索中である。
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[Publications] Shiozawa,M.,Hiraoka,Y.,Yasuda,K,Imamura,T.,Sakamuro,D.,Taniguchi,N.,Yamazoe,M. & Yoshikawa,H.: "Synthesis of human gammaーglutamyl transpeptidase during the fetal development of liver." Gene. 87. 299-303 (1990)
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[Publications] 山下 修二,塩沢 昌英,安田 健次郎: "急速凍結置換固定法ー免疫電顕への応用" 組織細胞化学. 25-34 (1990)
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[Publications] Yasuda,K.,Shiozawa,M.,Yamashita,S. & Aiso,S.: "Localization of γーglutamyl transpeptidase in human sweat glands:An immunohistochemical study using a monoclonal antibody." J.Histochem.Cytochem.38. 1433-1444 (1990)
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[Publications] Yasuda,K.,Yamashita,S.,Aiso,S. & Shiozawa,M.: "Microwave fixation:Examination of temperature in tissue during irradiation." Acta histochem.cytochem.23. 537-551 (1990)
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[Publications] Hiraoka,Y.,Tatsumi,K.,Shiozawa,M.,Aiso,S.,Fukasawa,T.Yasuda,K. & Miyai,K.: "A placentaーspecific 5' nonーcoding exon of human prolactin." Mol.Cell.Endocrinol.75. 71-80 (1991)
