1991 Fiscal Year Annual Research Report

健康及び病態時の中枢神経系における細胞内カルシウム依存性蛋白質リン酸化反応の役割

Research Project

Project/Area Number	01440027
Research Institution	Nagoya University
Principal Investigator	日高弘義名古屋大学, 医学部, 教授 (80100171)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	小林良二名古屋大学, 医学部, 助教授 (00020917) 萩原正敏名古屋大学, 医学部, 助手 (10208423)
Keywords	カルモデュリンキナ-ゼII / Aーキナ-ゼ / KNー62 / Hー89 / 蛋白質リン酸化反応 / 蛋白質リン酸化酵素阻害剤
Research Abstract	種々の細胞応答における蛋白質リン酸化酵素の生理的役割について、特異的阻害剤を用いて検討した。その結果、PC12細胞においてカルモデュリンキナ-ゼIIの特異的阻害剤であるKNー62は高カリウム刺激により惹起するチロシン水酸化酵素のリン酸化反応を抑制し、DOPA生成をも抑制する。しかし、Forskolinによって上昇するチロシン水酸化酵素のリン酸化およびDOPA生成には影響を与えないことからも、細胞内カルシウム濃度の上昇に伴うチロシン水酸化酵素のリン酸化および活性化機構にはカルモデュリンキナ-ゼIIが関与していることが明かとなった。また、cAMPー依存性蛋白質リン酸化酵素(Aーキナ-ゼ)の特異的阻害剤であるHー89を用いた実験結果から、PC12細胞においては細胞内カルシウムおよびcAMPにより上昇するimmedeately early genes(IEGs)の発現はともにAーキナ-ゼが関与していることが明かとなった。これら蛋白質リン酸化酵素阻害剤を用いることが蛋白質リン酸化酵素の生理的役割解明の良い手段であろうと考えられる。さらに、ウサギ脳より分子量80kDaのカルモデュリン依存性蛋白質リン酸化酵素をrenaturation blotting assay(RBA法)により見いだした。本酵素はその分子量、基質特異性、KNー62,MLー9,Wー7を用いた阻害剤感受性から、新しいタイプのカルモデュリン依存性蛋白質リン酸化酵素と考えられた。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] M.Terasawa et al.: "Ca^<2+>/calmodulinーdependent proカein phosphorylation associated with the cytoskeleton of quiescent rat fibroblast(3Y1)cells." J.Biochem.110. 417-422 (1991)
[Publications] A.Ishii et al.: "A selective Ca^<2+>/chlmodulinーdependent protein kinase II inhibitor,KNー62 inhibits the enhanced phosphorylation and the activation of tyrosine hydroxylase by 56 mM K^+ in rat pheochromocytoma PC12h cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.176. 1051-1056 (1991)
[Publications] N.Usuda et al.: "Differential localization of protein kinase C isozymes in retinal neurons." J.Cell Biol.112. 1241-1247 (1991)
[Publications] D.D.Ginty et al.: "Induction of immediate early genes by Ca^<2+> influx requires cAMPーdependent protein kinase in PC12 cells." J.Biol.Chem.266. 17454-17458 (1991)
[Publications] M.Sumi et al.: "The newly synthesized selective Ca^<2+>/calmodulin dependent protein kinase II inhibitor KNー93 reduces dopamine contents in PC12h cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.181. 968-975 (1991)
[Publications] M.Kato et al.: "Identification of a 80 kDa calmodulinーbinding protein as a new Ca^<2+>/camodulinーdependent kinase by renaturation blotting assay(RBA)." Biochem.J.281. 339-342 (1992)

1991 Fiscal Year Annual Research Report

健康及び病態時の中枢神経系における細胞内カルシウム依存性蛋白質リン酸化反応の役割

Principal Investigator

日高 弘義 名古屋大学, 医学部, 教授 (80100171)

Research Products

[Publications] M.Terasawa et al.: "Ca^<2+>/calmodulinーdependent proカein phosphorylation associated with the cytoskeleton of quiescent rat fibroblast(3Y1)cells." J.Biochem.110. 417-422 (1991)

[Publications] A.Ishii et al.: "A selective Ca^<2+>/chlmodulinーdependent protein kinase II inhibitor,KNー62 inhibits the enhanced phosphorylation and the activation of tyrosine hydroxylase by 56 mM K^+ in rat pheochromocytoma PC12h cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.176. 1051-1056 (1991)

[Publications] N.Usuda et al.: "Differential localization of protein kinase C isozymes in retinal neurons." J.Cell Biol.112. 1241-1247 (1991)

[Publications] D.D.Ginty et al.: "Induction of immediate early genes by Ca^<2+> influx requires cAMPーdependent protein kinase in PC12 cells." J.Biol.Chem.266. 17454-17458 (1991)

[Publications] M.Sumi et al.: "The newly synthesized selective Ca^<2+>/calmodulin dependent protein kinase II inhibitor KNー93 reduces dopamine contents in PC12h cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.181. 968-975 (1991)

[Publications] M.Kato et al.: "Identification of a 80 kDa calmodulinーbinding protein as a new Ca^<2+>/camodulinーdependent kinase by renaturation blotting assay(RBA)." Biochem.J.281. 339-342 (1992)

日高弘義名古屋大学, 医学部, 教授 (80100171)