1990 Fiscal Year Annual Research Report
核酸およびペプチドの超高選択的高感度蛍光プロ-ブ試薬の創製
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01460243
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
大倉 洋甫 九州大学, 薬学部, 教授 (00037574)
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| Keywords | 蛍光プロ-ブ / 蛍光試薬 / 核酸 / 核酸塩基 / ヌクレオシド / ヌクレオチド / ペプチド / トリプトファン |
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| Research Abstract |
1.核酸関連化合物の糖鎖認識用蛍光試薬の開発:(1)1,2ービス(4ーメトキシフェニル)エチレンジアミン試薬が,過ヨウ素酸ナトリウム存在下,酸性条件でリボヌクレオシドおよびそのヌクレオチドのリボ-スと反応し強い蛍光を発することを見い出した.この反応をHPLCのポストカラム反応システムに導入し,ヒト赤血球中のリボヌクレオチドの高感度分析法を開発した.(2)4ーカルバモイルベンズアミジン(CBA)試薬がデオキシリボ-スに対して選択的に強く発蛍光することを見い出し,核酸塩基と糖部を塩酸加水分解することによって,CBA試薬によるプリンデオキシリボヌクレオシドおよびそのヌクレオチドの高選択的蛍光定量法を確立した。
2.DNAハイブリダイゼイションアッセイにおけるペルオキシダ-ゼの高感度蛍光検出法の開発:1,2ージフェニルエチレンジアミン,アドレナロン及び過酸化水素の蛍光反応により,合成ポリマ-膜上の西洋ワサビペルオキシダ-ゼ(HRP)活性を計測できることが分かった.これにより,被測定物質DNAとビオチン化 _cDNAとのハイブリダイゼイションにおけるアビジン化HRP活性の新規蛍光検出法を開発した.
3.ペプチドの高選択的蛍光定量法の開発:Nー末端にチロシンを有するペプチドに極めて高選択的な蛍光反応を見い出している.本研究では,この反応をHPLCのポストカラム蛍光反応システムに適用した.その結果,Nー末端チロシン含有ペプチドを高感度かつ高選択的に検出できた.開発した分析法は,ラット脳組織(大脳皮質,線条体,視床下部,脳下垂体,海馬)に存在する7種類のオピオイドペプチド類(エンケファリンなど)の一斉定量を初めて可能にし,それらペプチドの酵素分解による同定にも利用できた.
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[Publications] Yoshihiko Umegae: "High performance liquid chromatographic determination of ribonucleotides by postcolumn derivatization involving oxidation followed by fluorescence reaction,and its application to human erythrocyte sample" Analytical Sciences. 6. 519-522 (1990)
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[Publications] Hitoshi Nohta: "Assay for peroxidase using 1,2ーdiarylethylenediamines and catechol compounds as fluorogenic substrates" Analytical Sciences.
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[Publications] GuoーQing Zhang: "Determination of seven opioid peptides in rat brain by high performance liquid chromatography with onーline postcolumn fluorescence derivatization" Analytical Sciences. 6. 671-676 (1990)
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[Publications] Eijiro Kojima: "Phenylglyoxal as a fluorogenic reagent selective for tryptophan" Analytical Chimica Acta.
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[Publications] Hiroaki Nagaoka: "2ー(5ーChlorocarbonylー2ーoxazolyl)ー5,6ーmethylenedioxybenzofuran as fluorescence derivatization reagent for nucleosides and nucleotides" Analytical Sciences.
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[Publications] Sayuri Yonekura: "Fluorimetric assay for double strand DNA by planylglyoxal and chloracetaldehyde reactions" Analytical Chimica Acta.
