tPAとPAインヒビタ-の結合様式の解明とそれに及ぼすフィブリンの影響の研究

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01480114
• Research Institution: Hamamatsu University School of Medicine
• Principal Investigator: 高田 明和 浜松医科大学, 医学部, 教授 (80092980)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 浦野 哲盟 浜松医科大学, 医学部, 助手 (50193967) ; 高田 由美子 浜松医科大学, 医学部, 助手 (90092981)
• Keywords: プラミノ-ゲンアクチベ-タ-インヒビタ- / PAI-1の構造 / 組織プラスミノ-ゲンアクチベ-タ- / t-PA・PAI-1複合体 / 胎盤

Research Abstract

プラスミノ-ゲンアクチベ-タ-インヒビタ-(PAI-1)の胎盤よりの純化を試みた。ヒト胎盤を生理的食塩水でホモジネ-トし、19,000rpm、45分間 遠心沈澱して上清をとった。これにTritonX-100を1%になるように加え、リジンセフアロ-スを通した後、Anhydrourokinase Sepharose 4Bに吸着させ、吸着部を1モル アルギニン溶液で溶出し濃縮した。さらにSephadex G-200を通した。PAI-1分画はSDS-PAGEで分子量50,000のところに一本のバンドとして得られた。まず、この分画のウロキナ-ゼ(UK)、組織プラスミノ-ゲンアクチベ-タ-(t-PA)との反応をしらべるため、Enzyme immunoassayでUK、t-PAとの結合をしらべた。シリコン片に抗PAI-1モノクロナル抗体を結合させ、これとPAI-1分画をインキュベ-トした。さらにこれにUKまたはt-PAを加えてインキュベ-トし、洗滌後、PAI-1と結合したUKまたはt-PAを抗UKまたは抗t-PA抗体を用い測定した。その結果、胎盤由来のPAI-1はt-PA,UKとモル-モルで結合することがわかった。PAI-1とt-PAまたはUKとのcomplexはプラスミノ-ゲン活性化能をもち、活性中心とDFPが結合することが知られており、また我々の実験でS-2288やS-2444のようなt-PA,UKに特異的な基質を水解した。
血管壁の培養液中のPAI-1は不活型でt-PAやUKを阻害せず、SDSやグアニジン、6Mウレア等の変性剤のもとで活性化される。しかし胎盤よりのPAI-1はt-PA,UKを若干阻害するのみなのに、トリトン等の界面活性剤のもとではt-PA,UKをよく阻害する。すなわちPAI-1はt-PA,UKの活性中心と結合するのでなく、変性剤などの存在下で高次構造を変化させ、活性中心を立体構造的に阻害すると考えられる。

Research Products

• [Publications] 菅原芳明 他: "プラスミノ-ゲンのエラスタ-ゼ分解に及ぼすトラネキサム酸とN末端ペプチドの影響" 血液と脈管. 20. 152-157 (1989)
• [Publications] 浦野哲盟 他: "ユ-グロビン溶解時間と血漿中t-PA,PAI濃度の関係" 血液と脈管. 20. 331-338 (1989)
• [Publications] TAKADA,A.: "Enhancement of the activation of Glu-plasminogen by urokinase in the simultaneous presence of tranexamic acid or fibrin" Haemostasis. 19. 26-31 (1989)
• [Publications] TAKADA,Y.: "Evidence for the formation of a trimolecular complex between streptokinase,plasminogen and fibrinogen" Thrombosis Research. 53. 409-415 (1989)
• [Publications] NISHINO,N.: "Measurement of urinary trypsin inhibitor in urine,plasma and cancer tissues of patients with stomach cancer" Haemostasis. 19. 112-119 (1989)
• [Publications] RYDZEWSKI,A.: "Absence of synergism between tissue-type plasminogen activator and urokinase on plasminogen activation rate in plasma" Thrombosis Research. 53. 577-583 (1989)
• [Publications] TAKADA,Y.: "The conversion of streptokinase-plasminogen complex to SK-plasmin complex in the presence of fibrin or fibrinogen" Thrombosis Research. 54. 133-139 (1989)
• [Publications] RYDZEWSKI,A.: "Determination of plasminogen activator inhibitor-l(PAI-1)in plasma using two different anticoagulants and methods" Thrombosis Research. 55. 285-289 (1989)
• [Publications] TAKADA,Y.: "Plasma levels of t-PA.free PAI-1 and a complex of t-PA with PAI-1 in human males and females at various ages" Thrombosis Research. 55. 601-609 (1989)
• [Publications] TAKADA,A.: "Inhibition by tranexamic acid of the conversion of single-chain tissue plasminogen activator to its two-chain form by plasmin:The presence on tissue plasminogen activator of a site to bind with lysine binding sites of plasmin" Thrombosis Research. 55. 717-725 (1989)
• [Publications] RYDZEWSKI,A.: "Stimulation of plasmin catalyzed conversion of single-chain to two-chain urokinase-type plasminogen activator by sulfated polysaccharides" Thrombosis and Haemostasis. 62. 752-755 (1989)
• [Publications] SAKAKIBARA,K.: "Urinary UK,T-PA and urinary trypsin inhibitor in health and glomerular diseases" Thrombosis Research. 56. 239-249 (1989)
• [Publications] TAKADA,A.: "Dermatologica" S.Karger AG, 146 (1989)