腸炎ビブリオの病原因子に関する研究

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01480179
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 本田 武司 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (60029808)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 余 明順 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (70093482) ; 山本 耕一郎 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (30158274)
• Keywords: 腸炎ビブリオ / 耐熱性溶血毒 / モノクロ-ナル抗体 / 線毛 / プロテア-ゼ

Research Abstract

1.毒素に関する研究
腸炎ビブリオの主要な病原因子と考えられている耐熱性溶血毒(TDH)の構造と機能相関を解析するために、まず、TDH類似毒素の分離精製を行ない、特にV.hollisaeの産生するTDH様毒素については、アミノ酸一次構造の決定を行った。また、生物活性を消失した変異TDH(Gly-90がAspー90に変異)の諸性状をTDHのそれらと比較した成績を報告した。さらに、TDHおよびTRHに対するモノクロ-ナル抗体の作成に成功し、抗原構造の詳しい解析を行い、TDHおよびTRHにはそれぞれ共通抗原決定基とともに特異抗原決定基が存在すること、また、毒素の生物活性の発現により関係深いエピト-プと関係が少いと思われるエピト-プの存在も示唆される成績が得られた。
2.定着に関する研究
腸炎ビブリオの定着因子についてはまだ一定の見解が得られておらず、様々な角度からの解析が加えられている。われわれも線毛とプロテア-ゼの2つに着目して解析をすすめている。類似菌のものとの比較検討も必要と考えられ、エロモナスや毒素原性大腸菌の線毛の精製を行い諸性状を報告した。腸炎ビブリオの線毛の精製もほぼ完了し、構造決定が現在進行中である。一方、プロテア-ゼについては、V.cholerae non-01のプロテア-ゼの精製を行い、腸炎ビブリオのプロテア-ゼとも比較して、すでに一部の成績を発表した。

Research Products

• [Publications] Honda,T.,Y.Ni,and T.Miwatani: "Purification of a TDH-related hemolysin produced by a Kanagawa phenomenon-negative clinical isolate of Vibrio parahaemolyticus" FEMS Microbiol.Lett.57. 241-246 (1989)
• [Publications] Miyake,M.,T.Honda and T.Miwatani: "Effects of divalent cations and polysaccharides on Vibrio metschinikovii cytolysin-induced hemolysis of rabbit erythrocytes" Infection and Immunity. 57. 158-163 (1989)
• [Publications] Sato,M.,M.Arita,T.Honda,and T.Miwatani: "Characterization of a pilus produced by Aeromonas hydrophila." FEMS Microbiol.Lett.59. 325-330 (1989)
• [Publications] Honda,T.,N.Cakir,M.Arita and T.Miwatani: "Purification and characterization of the CS2 pili of colonization factor antigen II produced by human enterotoxigenic Escherichia coli" Microbiol.Immunol.33. 265-275 (1989)
• [Publications] Honda,T.,L.Lertocasombat,A.Hata,T.Miwatani,and R.A.Finkelstein: "Purification and partial characterization of a protease produced by Vibrio cholerae non-01" Infection and Immunity. 57. 3452-3457 (1989)
• [Publications] Honda,T.,Y.Ni,M.Yoh and T.Miwatani: "Production of monoclonal antibodies against thermostable direct hemolysin of Vibrio parahaemolyticus and application of the antibodies for ELISA" Medical Microbiology and Immunology. 178. 245-253 (1989)
• [Publications] Honda,T.,Y.Ni,M.Yoh and T.Miwatani: "Evidence of immunological cross-reactivity between hemolysins of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio hollisae demonstrated by monoclonal antibodies." J.Infect.Dis.160. 1089-1090 (1989)
• [Publications] Honda,T.,Y.Ni,S.Hori and T.Miwatani: "A mutant hemolysin with lower biological activity produced by a mutant Vibrio parahaemolyticus" FEMS Microbiol.Lett.61. 95-100 (1989)
• [Publications] Nishibuchi,M.,T.Taniguchi,T.Misawa,V.Khaemanee-Iam,T.Honda,T.Mi.: "Cloning and nucleotide sequence of the gene(trh)encoding the hemolysin related to the therostable direct hemolysin of Vibrio parahaemolyticus" Infection and Immunity. 57. 2691-2697 (1989)
• [Publications] Yoh,M.,T.Honda and T.Miwatani: "Homogeneity of a hemolysin(Vh-rTDH)produced by clinical and environmental isolates of Vibio hollisae" FEMS Microbiol.Lett.61. 171-176 (1989)
• [Publications] Iida,T.,T.Tsuji,T.Honda,T.Miwatani,S.Wakabayashi,K.Wada and H.Matsubara: "A single amino acid substitution in B subunit of Escherichia coli enterotoxin affets its oligomer formation" Journal of Biological chemistry. 264. 14065-14070 (1989)
• [Publications] Honda,T.,N.Wetprasit,M.Arita and T.Miwatani: "Pilus colonization factors of enterotoxigenic Escherichia coli isolated from infantile diarrheal patients in Pupua New Guinea" Am.J.Trop.Med.Hyg.41. 220-223 (1989)