1990 Fiscal Year Annual Research Report
DMD遺伝子産物ジストロフィンの機能に関する免疫化学的解析
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01480238
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| Research Institution | University of Tokyo |
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Principal Investigator |
清水 輝夫 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (00107666)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
戸田 達史 東京大学, 医学部・附属病院, 医員
砂田 芳彦 東京大学, 医学部・附属病院, 医員
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| Keywords | ジストロフィン / DRP / 単クロ-ン抗体 / 免疫組織 / rotary shadowing |
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| Research Abstract |
DMD遺伝子産物ジストロフィン分子の構造と機能,臨床的意義を検討するためジストロフィンの4つのドメインに対する単クロ-ン抗体の確立をはかった。昭和62〜63年にかけてN末端ドメインに対する抗体A1Cを確立することができ,ジストロフィンが筋細胞膜に局在すること,DMDで欠損することを認めるとともに(Shimizu,T.et al ProcーJap Acad.64、205ー208,1988),神経筋・筋腱両接合部に特に高濃度に偏在するという新知見をうることができた。次いでこの抗体をマ-カ-としてジストロフィン分子の単離を千葉大理学部丸山教授と協同で試み,骨格筋200gより0.1mgの製品をうることに成功した。純度70%でrotary shadowingで観察した結果巾3nm,長さ100nmの双頭桿状構造が視覚化できた。これは予想された分子構造とよく一致しantiーpallel homodimerと考えられた。ジストロフィン桿状ドメイン,C端ドメインに対する抗体を調製途上,英国DaviesらがC端側に酸似する別のジストロフィン酷似蛋白(DRP)の存在が報告されたため,DRPとジストロフィン各々に特異的な抗体の調製をはかり,平成3年1月にDRPに対する抗体がえられ検討中である。他方英国Novocastra社よりC末端特異抗体(DYSー2)が作成されたため,A1C・DYSー2を使って多種類の神経筋疾患でのジストロフィン発現を検討しDMD/BMD以外に福山型と先天性筋緊張性ジストロフィ-で障害されていることを発見。前者では筋壊死に伴う二次的変化であるが後者では筋発生の遷延に伴う発現遅延であり発現障害因子の存在が強く示唆できた。又ジストロフィン欠損と筋細胞壊死との間に直接的因果関係のないことも証明できた。今後ジストロフィンのC末端ドメインの構造と機能に焦点をあてジストロフィンの機能解明に努力したい。
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[Publications] Matsumura,K.Shimizu,T.et al: "The immunoligical bomology between two filameutous crossーlinker Phosphoproteins,connectin and crossーbridge region of nearofilament H,is not attected by the phosphorylation stote" J.Biochem(Tokyo). 105. 226-230 (1989)
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[Publications] Matsumura,K.Shimizu,T and Mannen T.: "In vitro degradation of the Duchenue muscular dystrphy gene product (dystrophin)." Biomed.Res.10. 325-328 (1989)
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[Publications] Matsumura,K.Shimizu,T.et al: ";Immunoligical study of connectin (titin) in neuromuscular diseases:eonnectin is degraded extensively in Duchenne muscular dystrophy" J.Neurol.Sci.93. 147-156 (1989)
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[Publications] Hoshimoto,K.,Shimizu,T.et al: "Immunochemical analysis of human skeletal muscle alphaーactinin" J.Neurol.Sci.93. 199-209 (1989)
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[Publications] Ono,S.,Shimizu,T.et al: "Aruyotvophic lateral sclerosis;electrophoretic study of amorphous material of skin" J.Neurol.Sci.92. 156-167 (1989)
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[Publications] Shimizu,T.et al: "Deuse imwunosfoinings on both neusimuscular and myoteudon junctions with an autiーdystrophin monoclonal antibody" Biomed.Res.10. 405-409 (1989)
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[Publications] Matsumura,K.Shimizu,T.et al: "Isoelectvical Focusing of Counectin by Agarose Gel Electrophoresis" J.Biochem. (1990)
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[Publications] Shimizu,T.et al: "Immunohistochemical lecalization and Electron microscopic visualization of Dystrophin" J.Neurol.Sci. 98. 230 (1990)
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[Publications] Sunada,Y,Shimizu,T et al: "Delayed expression of Dystrophin in cogenital myotonic alystrophy" J.Neurol.Sci.
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[Publications] Hori,S.,Shimizu,T.et al: "Detection of dystrophin on twoーdimensional gel electrophoresis" Biochem.Biophys.Res:Comm.162. 726-731 (1989)
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[Publications] Murayama,T.Shimizu,T.et al: "Isolation of Dystrophin in Denatured forw from rabbit skeletal muscle myofibrils" Proc,Jap,Acad,Ser.B.65. 207-210 (1989)
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[Publications] Tanaka,T.Shimizu,T.et al: "Expression of a Dystrophinーlike protein on the surface memluane of muscle cells in max mice" Proc.Jap.Acod.ser,B. 65. 238-241 (1989)
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[Publications] Murayama,T.Shimizu,T.et al: "Molecular Shape of Dystrophin Purified from Rabbit skeletal Muscle Myotibrils" Proc,Jap.Acod,ser B. 66. 96-99 (1990)
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[Publications] Shimizu,T.: "Auryotrophic lateral Sclerosis:electrophoretic Study of amorphous material of skin" J.Neurol,Sci. 95. 111 (1990)
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[Publications] Matsumura,K.Shimizu,T.et al: "Degradation of Connectin (Titin) in Fukyama Type Congemital Musculas Dystrophy" J.Neurol,Sci. 98. 155-162 (1990)
