1990 Fiscal Year Annual Research Report
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01480240
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
辻 省次 新潟大学, 医学部附属病院, 助手 (70150612)
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| Keywords | subtractive cloning / neurodegenerative diseases / cDNA library / nervous system / brain / spinal cord / molecular cloning / linkage analysis |
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| Research Abstract |
昨年度までの研究において,ヒト剖検脳から死後12時間以内であれば分解を受けていないメッセンジャ-RNAを抽出できることを明らかにした。剖検脳および脊髓からのメッセンジャ-RNAの抽出法を確立した上で,次にcDNAライブラリ-の作製方法について検討を加え,subtraction cloningに便利なように,一本鎖DNA,あるいはsenseおよびanti senseのRNAプロ-ブが合成できるベクタ-を用いるcDNAライブラリ-の作製方法を確立した.この方法で作製されたcDNAライブラリ-はcomplexityが十分高く,全長のcDNAを多数含む良質のcDNAライブラリ-であることが判明した.次に,脊髄に特異的な遺伝子を同定することを目的としてヒト脊髄のcDNAライブラリ-とヒト大脳のcDNAライブラリ-の間でphenolーemulsion reassociation techniqueを用いてsubtractionを行い,脊髄のcDNAライブラリ-に存在して大脳のcDNAライブラリ-で発現量の少ない遺伝子の同定を試み,4種類のcDNAクロ-ンを単離することが出来た.このうち2つのクロ-ンがノ-ザン解析においてもメッセンジャ-RNAの発現が脊髄で増加していることが確認され,subtraction cloningの目的が達成されたことが分かった。ここで得られたクロ-ンは比較的発現量の多い遺伝子であり,発現量の少ない遺伝子群を効率よく単離するためにはsubtraction cloningの効率をさらに改良する必要があると考えられた.
また,遺伝性変性性神経疾患の病因の解明のための有力な手段の一つとして連鎖解析により疾患遺伝子の存在する染色体座が決定できるが,常染色体性劣性遺伝形式をとる若年性パ-キンソニズムについてのチロシン水酸化酵素遺伝子座の存在する第11染色体短腕についての連鎖解析を行い若年性パ-キンソニズムの遺伝子座がこの領域に存在せず,チロシン水酸化酵素遺伝子の異常が存在しないことを証明した。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Hisashi Kobayashi: "Stability of messenger RNA in postmortem human brains and construction of human brain cDNA libraries." J.Mol.Neurosci.2. 29-34 (1990)
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[Publications] Hajime Tanaka: "Linkage analysis of juvenile parkinsonism to tyrosine hydroxylase gene locus on chromosome ll." Neurol.
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[Publications] Ryoko Koike: "Physiological significance of fatty acid elongation system in adrenoleukodystrophy." J.Neurol.Sci.
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[Publications] Rui Kondo: "Identification of a mutation in arylsulfatase A gene of a patient with adult type metachromatic leukodystrophy." Amer J.Hum.Genet.
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[Publications] Makoto Yoneda: "A common mitochondrial DNA mutation in the tーRNA^<Lv3> of patients with myoclonus epilepsy associated with raggedーred fibers." Biochem.Int.21. 789-796 (1990)
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[Publications] Toyoaki Yamauchi: "Molecular cloning of two species of cDNAs for Human αーNーacetylgalactosaminidase and expression in mammalian cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.170. 231-237 (1990)
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[Publications] Shoji Tsuji: "Molecular cloning of a fullーlength cDNA for human αーNーacetylgalactosaminidase (αーgalactosidase B)." Biochem.Biophys.Commun.163. 1498-1504 (1989)
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[Publications] Makoto Yoneda: "Mitochondrial mutation in family with Leber's hereditary optic neuropathy." Lancet. 1. 1076-1077 (1989)
