1991 Fiscal Year Annual Research Report
モノクロ-ナル抗体を用いたアルツハイマ-病脳内異常構造物に関する生化学的研究
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01480281
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| Research Institution | SAPPORO MEDICAL UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
深津 亮 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (10113614)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤井 充 札幌医科大学, 医学部, 助手 (80199299)
高畑 直彦 札幌医科大学, 医学部, 教授 (20000987)
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| Keywords | アルツハイマ-病 / アミロイド / アミロイド前駆体蛋白 / Bー蛋白 / serum protein 40ー40 / 35kDa蛋白 / モノクロ-ナル抗体 |
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| Research Abstract |
アルツハイマ-病に特徴的な異常構造物である神経原線維変化(NFT,PHF)と老人斑(アミロイド斑、Am)の構成成分を明らかにし、異常構造物の形成過程を解明するために種々のmcAbを作製、応用し以下の結果をえた。
1アミロイド前駆体蛋白(APP)のドメインに対するモノクロ-ナル抗体の樹立;APPの各ドメインのアミノ酸配列に従って5部位のペプチドを合成した。これを抗原としてmcAbの樹立を試みた。Bペプチド部分、細胞外ドメインに対する極めて力価の高いmcAbを得る事に成功した。しかし他ドメインに対する抗体は、力価が低かった。そのためカップリング法をかえて、再度免疫してmcAbの樹立を行っている最中である。
2mcAbのエピト-プの解析;これまでに樹立したmcAbのうちAPPと強く反応する1クロ-ンの抗体について、B蛋白部分を含む多数の合成ペプチドをもちいてエピト-プを詳細に決定する事が出来きた。このmcAbはヒトB4ー10を特異的に認識する抗体である事が分かった。同様の方法を用いてB蛋白にたいするmcAbについてもエピト-プのマッピングを終えた。以上のmcAbはsoluble APPのほかintracytoplasmicなAPPを認識するため、APPのプロセシングについて検討可能となった。その結果APPの産生や処理過程は細胞の種類が異なると差異がある事を示唆する所見がえられた。そのため現在APPのmRNAの定量を同時に行い詳細を明らかにすべく検討している。
3未知の構成成分の同定;アミロイドに対する抗体のうち未知の構成成分を認識するmcAbを用いて、その構成成分の同定する試みを続けてきた。このうち2つの抗体が80kDaの血清蛋白と反応した。このmcAbを用いて、反応蛋白を精製してdirect microspquencingを行いアミノ酸配列を決定した。ホモロジ-検索のほか詳細な検討を終えて、serum protein 40ー40がアミロイドの構成成分である事を証明した。Am形成におけるこの蛋白の役割について検討している。またほかのmcAbが35kDaの血清蛋白と反応した。最近構成成分として報告され、類似の分子量をもつapolipoprotein Eとの反応性を調べて、この蛋白が新しい構成成分である可能性について検討を行っている。
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[Publications] 深津 亮: "Alzheimer病へのモノクロナ-ル抗体によるアプロ-チー原線維変化、老人斑の免疫病理を中心にー" 精神神経学雑誌. 第91巻. 751-760 (1989)
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[Publications] Yuji Takamaru: "Monoclonal antibodies against paired herical filament in Alzheimer's disease and Parkinsonismーdementia complex of Guam." Basic,Clinical,and Therapeutic Aspect of Alzheimer's and Parkinson's diseases. edited by T Nagatsu,Plenum press NY. vol 1. 203-206 (1990)
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[Publications] Yuji Aizawa: "Monoclonal antibodies against senile plaque amyloid in Alzheimer's disease." Basic,Clinical,and Therapeutic Aspect of Alzheimer's and Parkinson's diseases. edited by T Nagatsu,Plenum press NY. vol 1. 59-63 (1990)
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[Publications] Yuji Aizawa: "Monoclonal antibodies raised against native amyloid in Alzheimer's disease ーestablishment and characterizationー"
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[Publications] Ryo Fukatsu: "Monoclonal antibody raised against native amyloid recognizes soluble form of amyloid precursor protein from certain cell culture."
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[Publications] Yuji Takamaru: "Serum protein 40ー40 is involved in amyloid plaque formation in Alzheimer's desease."
