Bacteroides gingivalisのもつ菌凝集素に対する阻害物質の役割

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01480482
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 常光 旭 大阪大学, 歯学部, 教授 (40034160)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岩倉 功子 大阪大学, 歯学部, 助手 (60168549) ; 天野 敦雄 大阪大学, 歯学部, 助手 (50193024) ; 竹下 哲生 大阪大学, 歯学部, 助手 (10163396) ; 井下 英二 大阪大学, 歯学部, 助手 (00135724)
• Keywords: バクテロイデキジンジバリス / 菌凝集阻害物質 / ヒスタチン / フィブリノ-ゲン

Research Abstract

昨年度の研究において<Bacteroides>___ー <gingivalis>___ーと<Streptococcus>___ー <mitis>___ーとの共凝集を強く阻害する物質として、ヒト唾液よりヒスチジン高含有ペプチドおよび血漿よりフィブリノ-ゲンを分離・精製した。本年度はこれら阻害物質による共凝集の阻害機構について検討を加えた。ヒト耳下腺唾液より分離・精製した高ヒスチジン含有ペプチドのアミノ酸配列を解析したところ、12のアミノ酸からなり、その配列はヒスタチン8と完全に一致した。そこで、[^3H]ラベルしたヒスタチン8を用いて、共凝集を起す両菌株との結合性を調べたところ、ヒスタチン8はB__ー.<gingivalis>___ーとは結合したが、S__ー.<mitis>___ーとの結合は認められなかった。さらに、[^<125>I]ラベルしたヒスタチン5を用いて、B__ー.<gingivalis>___ーとの結合に対してScatchard解析を行った。その結果、この反応の親和定数は3.5×10^<-6>Mであり、そのレセプタ-の数は1細胞当り3600であった。一方、フィブリノ-ゲンによる阻害について検討するため、まず、共凝集に用いた各菌体とフィブリノ-ゲンとを前もって反応させた後、この共凝集阻害の有無を調べた。プロテア-ゼインヒビタ-存在下でB__ー.<gingivalis>___ーとフィブリノ-ゲンを前処理した時のみ、フィブリノ-ゲンの共凝集阻害活性がみられた。そこで、^<125>Iーフィブリノ-ゲンを用いて両菌体との結合性を調べたところ、B__ー.<gingivalis>___ーとのみ特異的に結合した。また、共凝集およびB__ー.<gingivalis>___ーとフィブリノ-ゲンとの結合は共に糖では阻害されずアミノ酸の一種であるアルギニンによって阻害された。以上の結果から、B__ー.<gingivalis>___ーとS__ー.<mitis>___ーとの共凝集へのヒスタチンおよびフィブリノ-ゲンによる阻害は、両阻害物質がB__ー.<gingivalis>___ー菌体と結合することにより生じ、その阻害には、フィブリノ-ゲンやヒスタチンがもつ塩基性アミノ酸残基が強く係わっていることが示唆された。

Research Products

• [Publications] 高垣 勝: "ヒト顎舌下腺唾液から精製したシアロ糖タンパク質の生化学的性質とそのモノクロ-ナル抗体の作製" 口腔衛生学会雑誌. 40. 528-529 (1990)
• [Publications] 高垣 勝: "ヒト顎舌下腺唾液から精製したシアロ糖タンパク質に対するモノクロ-ナル抗体の応用" 口腔衛生学会雑誌. 40. 530-531 (1990)
• [Publications] Yukitaka Murakami: "Purification and characterization from human parotid secretion of a peptide which inhibits hemagglutination of <Bacteroides>___ー <gingivalis>___ー 381" FEMS Microbiology Letters. 72. 275-280 (1990)
• [Publications] Yukitaka Murakami: "Inhibitory effects of synthetic histidineーrich peptides on hemagglutination by <Bacteroides>___ー <ginivalis>___ー 381" Archs Oral Biol.35. 775-777 (1990)
• [Publications] Hideki Nagata: "Inhibition of coaggregation between <B.gingivalis>___ー and <S.mitis>___ー by fibrinogen" J.Dent.Res.69. 1050 (1990)
• [Publications] Yukitaka Murakami: "Inhibition of hemagglutination of B.gingivalis by histatin in human parotid saliva" J.Dent.Res.69. 1060 (1990)