1990 Fiscal Year Annual Research Report
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01480527
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
山下 哲 群馬大学, 医学部, 教授 (50025623)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小瀧 努 群馬大学, 医学部, 助手 (70170264)
内田 勉 群馬大学, 医学部, 助手 (00160276)
仁川 純一 群馬大学, 医学部, 講師 (00134271)
保坂 公平 群馬大学, 医学部, 講師 (70108992)
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| Keywords | リン脂質合成 / 遺伝子クロ-ニング / プロモ-タ- / ホスファチジルエタノ-ルアミンメチル化経路 / コリンキナ-ゼ |
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| Research Abstract |
ホスファチジルコリンは生体膜の形成にあずかり、真核生物の種々の生理機能に深くかかわっている。本年度はその生合成がどのように調節されているかを明らかにするため、酵母とラット肝臓を材料に用い、ホスファチジルエタノ-ルアミンメチル化経路とCDPコリン経路の酵素遺伝子の発現機構の研究を行ない次のような成果を得た。
1.<酵母ホスファチジルエタノ-ルアミンメチル化経路の構造遺伝子PEM1、PEM2の発現の調節>___ー。本経路の酵素は遺伝子PEM1、PEM2によってコ-ドされている。これらの遺伝子はともにイノシト-ルとコリンによって同じように調節されている。これは両遺伝子の転写が共通の機構によって制御されているためであると考え、両遺伝子の上流域の解析を行なった。その結果、5'上流域に存在する特定の塩基配列がPEM1、PEM2の発現と調節に重要な役割を果たしていることがわかった。その配列はPEM1遺伝子の場合にはオクタマ-配列CATRTGAAの繰り返しであり、PEM2遺伝子の場合にはCATRTGAAとGRF1結合部位の組み合わせであると同定された。酵母抽出液の中にこれらの配列に特異的に結合する蛋白質を同定した。
2.<ラットコリンキナ-ゼcDNAのクロ-ニング>___ー。コリンキナ-ゼはCDPコリン経路の初発酵素でいろいろな条件下に変動する。コリンキナ-ゼ遺伝子の発現調節を明らかにするために、コリンキナ-ゼのcDNAクロ-ニングを行なった。ラット脳キリンキナ-ゼに対する抗体を用いて、λllcDNAライブラリ-からコリンキナ-ゼcDNAクロ-ンを得た。得られたcDNAを発現ベクタ-に挿入して大腸菌に導入したところコリンキナ-ゼ活性が発現した。構造解析の結果酵母コリンキナ-ゼ遺伝子との間に有意のホモロジ-が見出された。
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[Publications] 保坂 公平: "Cloning and characterization of the yeast <CKI>___ー gene encodind choline kinase and its expression in <Escherichia>___ー <coli>___ー" Journal of Biological Chemistry. 264. 2053-2059 (1989)
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[Publications] 小瀧 努: "Characterization of the methyltransferases in the yeast phosphatidylethanolamine methylation pathway by selective gene disruption" European Journal of Biochemistry. 185. 243-251 (1989)
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[Publications] 内田 勉: "Purification and properties of choline kinase from rat brain" Biochimica et Biophysica Acta. 1043. 281-288 (1990)
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[Publications] 保坂 公平: "Repression of choline kinase by inositol and choline in <Saccharomyces>___ー <cerevisiae>___ー" Journal of Bacteriology. 172. 2005-2012 (1990)
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[Publications] 仁川 純一: "Primary structure of the yeast choline transport gene and regulation of its expression" Journal of Biological Chemistry. 265. 15996-16003 (1990)
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[Publications] 仁川 純一: "Isolation and characterization of two distinct <myo>___ーーinositol transport genes of <Saccharomyces>___ー <cerevisiae>___ー" Journal of Biological Chemistry. 266. (1991)
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[Publications] 内田 勉: "Choline/ethanolamine kinase from rat liver Methods in Enzymology,Phospholipid Synthesis" Academic Press, (1991)
