1990 Fiscal Year Annual Research Report
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01480538
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
藤澤 久雄 京都大学, 理学部, 教授 (00025347)
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| Keywords | T3ファ-ジ / 頭部形成 / DNA成熟 / DNA詰込みシグナル / シグナル認識 / 分子機構 |
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| Research Abstract |
T3ファ-ジDNAは両端に重複配列を持つ。ファ-ジDNAは重複配列を介してheadーtoーtailに連なったコンカテマ-として合成され、頭部形成の際、コンカテマ-からゲノムDNAが切り出され(DNA成熟)、頭部内に詰込まれる。T3ファ-ジは自己DNAを選択的に頭部に詰込む。DNA成熟は詰込みに依存している。コンカテマ-から重複配列を含むDNA断片をプラスミドにクロ-ンすると、T3ファ-ジはこのプラスミドを頭部に詰込み、他細胞に形質導入する。この形質導入系を用いて、詰込みに必要なpac配列はT3RNAポリメラ-ゼのプロモ-タ-配列(pacB)及び重複配列とその隣接配列からなるDNA切断の標的配列(pacC)から構成されている事が明かになった。近縁のT7ファ-ジとのキメラpac配列を持つプラスミドの形質導入の特異性の解析はpacB配列がDNA詰込みの特異性決定配列である事を示した。精製in vitroDNA詰込み系はpacC配列を持つ線状DNAを左方向に詰込んだ後、重複配列の左端で切断した。in vivoDNA詰込みは左方向に進行するので、この切断はコンカテマ-からゲノムDNAを切り離す終結切断に相当する。終結切断と詰込み反応の解析から、DNAが頭殼内を充すにつれ、詰込み速度が低下し、それにより標的配列の認識が可能になり、終結切断が誘起されると結論した。終結切断にはT3/T7間で特異性はない。これらの事実はDNA詰込みにおける自己DNAの選択はDNA詰込み装置がコンカテマ-DNA上のpacB配列を認識して結合し、pacC配列上の重複配列の右端で切断し、詰込み開始に必須なDNA端を創る開始切断にある事を示す。詰込み蛋白質gp19に突然変異を導入し、pacC配列を認識するが切断活性を失った変異体を分離して、gp19がDNA成熟に中心的役割を持つことを明らかにした。
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[Publications] 藤澤 久雄: "二重鎖DNAバクテリオファ-ジ頭部形成におけるDNA移送機構について" 生物物理. 29. 14-17 (1989)
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[Publications] 藤澤 久雄: "バクテリオファ-ジ形態形成におけるコネクタ-の役割" 電子顕微鏡. 24. 1-8 (1989)
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[Publications] Hisao Fujisawa: "In vitro cleavage of the concatemer joint of bacteriophage T3 DNA" VIROLOGY. 174. 26-34 (1990)
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[Publications] Makoto Kimura: "Dissection of functional domains of the packaging protein of bacteriophage T3 by siteーdirected mutagenesis" VIROLOGY. 180. 709-715 (1991)
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[Publications] Jose M.Valpuesta: "Three dimensional strueture of T3 connector purified from overーexpressing bacteria" J.Mol.Biol.
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[Publications] Chikara Hasimoto: "DNA sequences necessary for packaging of bacteriophage T3 DNA" VIROLOGY.
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[Publications] 瀬野 悍二編,皆川 貞一: "バクテリオファ-ジ「バイオサイエンス戦略マニュアル」" 共立出版株式会社, (1990)
