1989 Fiscal Year Annual Research Report
メ-プルシロップ尿症の分子遺伝学的研究、特に病態との関連について
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01480553
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
松田 一郎 熊本大学, 医学部, 教授 (10000986)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
遠藤 文夫 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (00176801)
永田 憲行 熊本大学, 教育学部, 助教授 (20109698)
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| Keywords | メ-プルシロップ尿症 / DNA解析 / cDNA / 分枝鎖ケト酸脱水素酵素 |
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| Research Abstract |
メ-プルシロップ尿症(MSUD)は分枝鎖ケト酸脱水素酵素(BCKDH)の次損によっておこる先天代謝異常症である。BCKDHは3つのサブユニットdecarboxylase(E_1),transacylase(E_2),及びdihydrolipoamide dehydrogenase(E_3)からなる酵素複合体である。E_1はさらにE_1α,E_2βの2つのサブユニットからなっている。
MSUDはE_1α,E_2β及びE_2の障害で生ずる。これまで我々は抗体を用いた免疫学的解析法で、E_1β,E_2欠損症の多数の患者を見出している。今回の研究はこの障害をDNAレベルで解析するために、E_1β,E_2のcDNAの単離と、その解析を行った。
E_2:ヒト胎盤由来のcDNAライブラリ-から、免疫スクリ-ニングを行い、世界で初めて完全長のcDNAを単離した。これは1431bpのオ-プンリ-ディングフレ-ムと3'側1205bpの非翻訳域をもつ2649bpの長さを持っている。477アミノ酸残基の前駆体として合成され、N末の56のアミノ酸がプロセッシングを受け、421の成熟型となる。ウシのE_2との間に92%のホモロジ-がある。
E_1β:ウシ肝由来のcDNAライブラリ-から、E_1βペプチドC末構造から推定された合成オリゴヌクレオチドを用いてスクリ-ニングし、全長のcDNAを世界で初めて単離した。5'側186bp,3'側306bpの非翻訳領域、1176bpの翻訳域をもつ全長1668bp cDNAであることが解った。このことからウシE_1βは392のアミノ酸残基の前駆体として合成されるが、N末50のアミノ酸がプロセッシングを受け、成熟型になることが明らかになった。現在ヒトE_1β cDNAを単離中である。
今後、遺伝子のDNAの解析、患者変異遺伝子解析を行う。
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[Publications] Yoshitaka Nobukuni: "Complete primary structure of the transacylase(E_2b)subunit of the human branched chain α-keto acid dehydrogenase complex" Bioch.Biophy.Res.Comm.161. 1035-1041 (1989)
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[Publications] Yoshitaka Nobukuni: "Isolation and characterizateion of a complementary DNA clene coding for the E_1β subunit of bovine branched chain αーketo acid dehydrogenase complex" Biochemistry. 29. 1154-1160 (1990)
