1990 Fiscal Year Annual Research Report
大麦根の鉄ームギネ酸錯体の吸収リセプタ-遺伝子の構造決定
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01560070
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
森 敏 東京大学, 農学部, 助教授 (90011915)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西譯 直子 東京大学, 農学部, 助手 (70156066)
平野 久 農林水産省, 生物資源研究所・分子育種部・生育遺伝子研究室, 主任研究官
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| Keywords | ムギネ酸 / 水性二層分配 / ポリクロ-ナル抗体 / モノクロ-ナル抗体 / マウスハイブリド-マ / モノクロ-ナル抗体 / アフィニティカラムクロマトグラフィ- / リセプタ-遺伝子 |
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| Research Abstract |
大麦根の鉄ームギネ酸錯体(Fe(III)ーMAs)の吸収リセプタ-遺伝子を釣り上げるために,二性二層分配法により分離したFe欠令大麦根細胞膜画分をSDSーPAGEで展開し,銀染色により,14,28,40KDeのペプチドバンドにFe処理区との間に差を認めた。そこでこの膜画分を再度二次元電気泳動して,両者の間でスポットの差を調べたが,顕著な差を示すスポットを見出すことができなかった。
そこで今年は方針を変更し,まずムギネ酸類に対するモノクロ-ナル抗体を採り,これに対する抗抗体を作成し,それを用いて,Fe(III)ーMAs吸収リセプタ-遺伝子をスクリ-ニングすることとした。
そのためにまず、MAs類に対する抗体の作成を行うこととした。このような低分子はBSAと結合して抗原としなければならないためMAsーBSA結合体を作成しようとしたが,反応基との関係でNA(ニコチアナミン)ーBSAを抗原として用い,そのあとMAsに対するモノクロ-ナル抗体をスクリ-ニングすることとした。NAーBSAに対するウサギのポリクロ-ナル抗体が得られ,抗体価はNA(100%),DNA(デオキシムギネ酸100%),MA(ムギネ酸82.8%)であったがepiHMA(エピハイドロキシムギネ酸)やHMA(ハイドロキシムギネ酸)に対してはゼロであった。現在マウスハイブリド-マから数種のNA抗体をもつクロ-ンを選抜している。
将来は,抗NA抗体のアフィニティカラムで目的蛋白質を精製する予定である。
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[Publications] Mihashi S: "Enhancement of mugineic acidーFe^<3+> uptake by Feーdeficient barley roots in presence of excess mugineic acid in the medium" Plant and Soil. 129. (1990)
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[Publications] Mori S: "Identification of rye chromosome 5R as a carrier of the ganes for MA synthetase and 3ーHMA synthetase using wheatーrye addition lines" Jpn.J.Genetics. 65. 343-352 (1990)
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[Publications] Shojima S: "Biosynthesis of Phytosiderophores" Plant Physiology. 93. 1497-1503 (1990)
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[Publications] Shojima S: "Antiーnicotianamine antibodies crossーreacting with mugineic acid 2'ーdeoxymugineic acid" Soil Science and Plant Nutrition. 37. (1991)
