1990 Fiscal Year Annual Research Report
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01570175
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
白石 泰三 三重大学, 医学部, 助教授 (30162762)
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| Keywords | 前立腺癌 / 潜在癌 / 癌遺伝子 / 遺伝子増幅 / cーmyc / Hーras / Kiーras |
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| Research Abstract |
1.材料
AMeX(Aceton Methylbenzoate Xylene 包埋)法により組織標本を作成し病理学的検索がなされたのは84例で,各症例あたり平均で20個のブロックが作成された.このうち22例(26.2%)に潜在癌が発見された.
DNA抽出,分析
AMeX包埋前立腺組織の100μ厚の切片重量は脱パラフィン前で43ー56mgであり,脱パラフィンにより平均42%減少した.同切片からphenol法で48ー65μgのDNAを回収し,その収率は0.13ー0.15%であった.回収されたDNAはアガロ-ス電気泳動法により数十kb以上の高分子を多く含むことが確認された.
3.癌遺伝子増幅の検索
上記により得られたDNA試料をナイロンメンブランに10μlずつスポットし,ビオチン標識したDNAprobeでhybridizeし,遺伝子増幅の有無を検討した.用いたprobeはcーmyc 3rd exon,cーHaーrasおよびcーKiーras癌遺伝子に対するもので,hybridizationの条件は42℃,overnight incubationで,使用してprobeの濃度はいずれも12.5μg/mlで,緩衝液は5XSSC,45% formamideを含むものである.発色はalkaliーphosphatase標識streptavidine/BCIP法を用いた.検索した全例でこれらの癌遺伝子の増幅はみられなかった.
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