1990 Fiscal Year Annual Research Report
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01570204
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| Research Institution | Ryukyu University |
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Principal Investigator |
岩政 輝男 琉球大学, 医学部, 教授 (10110842)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中嶋 安嗣 琉球大学, 医学部, 助教授 (90180281)
内海 康文 琉球大学, 医学部, 助手 (90203562)
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| Keywords | リソゾ-ム酸性αーグルコシダ-ゼ / Pompe病 |
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| Research Abstract |
平成元年度:リソゾ-ム酸性αーグルコシダ-ゼを分離し、アミノ酸配列を一部決定した。さらに抗体を作製した。酵素を精製する過程で、酸性αーグルコシダ-ゼはセファクリルSー200ゲルのクロマトグラフィ-で再現性よく2つの成分(S1とS2)に分かれることが明らかになった。さらにS1とS2はSDS電気泳動でそれぞれが76kDaと67kDaの成分を含むことが確かめられ、それらはクロマトフォ-カシングで分取出来た。アミノ酸配列の検討から76kDaの成分はS1のものもS2のものも同じ組成であり67kDaの成分はいずれも76kDaの成分より生じたものであることが明らかとなった。抗体はそれら4つの成分を用いて作製しても、いずれの成分にも反応した。モノクロナ-ル抗体で4成分を別々に認識するものは作製できなかった。
平成2年度:酸性αーグルコシダ-ゼのmRNAをショ糖密度勾配法で取り出しcDNAを合成し検討を行うとともに、平成元年度に行ったセファクリルSー200ゲル濾過の結果を検討した。S1とS2成分は肝、腎及び心など各臓器で見いだされ、含量に差はあるものの、各臓器とも76及び67kDaの成分を含んでいた。しかし、マクロファ-ジではS1の76kDa成分だけが見られた。S1の76と67kDa及びS2の76と67kDa成分はいずれもメチルウンベリフェリルグルコサイドやマルト-ス等を基質とするKm値やVmax値に大きな差異は見られなかった。そこで4成分の糖鎖の分析を行った。さらに収集しているPompe病線維芽細胞にSV40ラ-ジTDNAを導入して大量培養したものについても糖鎖の分析を行った。S1とS2では糖鎖は、高マンノ-ス型であるが、複合型も少量見られEndo Hで消化されず、Endo F及びPNGaseで部分消化される。cDNA構造以外に、組織細胞による、特にマクロファ-ジにおける酵素成分の違いや糖鎖の違いに、今後焦点をあてる必要がある。さらに、他のリソゾ-ム酵素との比較も必要である。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] Kuriyama M,Kohriyama T.,Iwamasa T.et al.: "Lymphocyte αーglucosidase in lateーonset glycogenosis type II" Arch.Neurol. 46. 460-462 (1989)
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[Publications] Ohshita T.,Sakuda H.,Nakasone S.and Iwamasa T.: "Purification,characterization and subcellular localizaton of pig liver αーLーiduronidase" Eur.J.Biochem. 179. 201-207 (1989)
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[Publications] Iwamasa T.,Sakuda H.,Nakasone S.and Ohshita T.: "Pathologic studies of lysosomal storage disease" Acta Histochem.Cytochem.23. 65-80 (1990)
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[Publications] Sakuda H.,Kusaba A.,Ohshita T.and Iwamasa T.: "Tissue and cellular distribution of αーLーiduronidase in pig" J.Histochem.Cytochem.38. 785-792 (1990)
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[Publications] Nakasone S.,Ohshita T.and Iwamasa T.: "Heterogeneity of pig lysosomal acid αーglucosidase: Affinity to Sephacryl Sー200 gel and tissue distribution" Biochem J.(1991)
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[Publications] 岩政 輝男: "筋病理学 檜沢.埜中.小沢編" 文光堂, 18/480 (1989)
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[Publications] 岩政 輝男: "現代病理学大系11a" 中山書店, 9/409 (1990)
