免疫グロブリンH鎖遺伝子の再構成に関与する核内因子のcDNAクロ-ニング

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01570268
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 杉山 治夫 大阪大学, 医学部, 助手 (70162906)
• Keywords: 免疫グロブリン遺伝子の再構成 / recombinase

Research Abstract

Abelsonウイルスの温度感受性変異株(ts mutant)を分離し、このウイルスでトランスフォ-ムしたマウス未熟B系細胞株を樹立し、35℃での培養では、モノクロ-ナルに増殖するが、39℃で培養すると、免疫グロブリン遺伝子の再構成が誘発される系を確立し、この系を用いて、免疫グロブリンH鎖遺伝子の再構成機構に関与する遺伝子をクロ-ニングすることを、平成元年度の研究目的として来た。先ず、免疫グロブリン遺伝子の再構成をおこしている細胞よりcDNAを合成し、他方、全く再構成を起こさない細胞から作ったcDNA間で、differentical hybcidization法で、再構成に特異的なcDNAクロ-ンの単離を試みたが特異的なcDNAクロ-ンを単離することができなかった。そこで、手法を改め、現在、subtraction法を用いて、特異的クロ-ンの単離を試みている。一方、タンパクレベルからの解析も進めて来た。recombinaseが認識すると考えられているsignal配列を合成し、この合成signal配列を用いたAffinityカラムを用いて、現在、signal配列特異的結合タンパクの精製を現在すすめている。

Research Products

• [Publications] T.Maeda: "The DJ_H complex remains active in recombination to V_H segments after the loss of μーchain expression in μーpositive preーB cells." J.Immunol.142. 3652-3656 (1989)
• [Publications] T.Komori: "A novel V_HDJ_H to J_H joining that induces H chain production in an IgーNull Immature B cell line." J.Immunol.143. 1040-1045 (1989)
• [Publications] Y.Oka: "Isolation and characterization of temperatureーsensitive mutants of Abelsen murine leukemia virus that exhibit dissociation among morphological transformation,soft agar colonyーforming ability and tyrosine kinase activity." J.Gen.Virol.70. 2527-2532 (1989)
• [Publications] H.Sugiyama: "Infrquent utilization of the immunoglobulin heavy chain variable region(s)identical or closely related to that of MOPC315 myeloma protein in the functional V region formaation in Bーprecursor cell lines." Immunology. 68. 453-475 (1989)
• [Publications] S.Tsukada: "Estimation of D segment usage in initial D to J_H joinings in a murine immature B cell line." J.Immunol.(1990)
• [Publications] S.Miyake: "Identification of a recombinational signal sequencespecific DNAーbinding protein(s)of Mr 115,000 in the nuclear extracts from immature lymphoid cell lins." J.Immunol.(1990)